Publicité
Vivalytic Bordetella
– Návod k použití
Reagencie
Všechny reagencie pro zpracování vzorku jsou zabudované v kazetě. Zpra-
cování zahrnuje lýzu buňky, extrakci nukleové kyseliny, amplifikaci DNA a
detekci.
Reagenciemi jsou PCR mikrokuličky, vazebný pufr, promývací pufr a eluční
pufr. Mikrokulička PCR obsahuje DNA polymerázu, primery a sondy. Vazebný
pufr usnadňuje vazbu nukleových kyselin v průběhu procesu purifikace. Pro-
mývací pufr je směs různých solí a rozpouštědel k odstranění nečistot, např.
proteinů, v průběhu procesu extrakce. Eluční pufr je pufr s nízkým obsahem
solí a na konci procesu extrakce obsahuje purifikované nukleové kyseliny.
Typy vzorků / médium
Test je určen k detekci nukleových kyselin B. pertussis (sekvence cílového
genu IS481), B. parapertussis (sekvence cílového genu pIS1001) a B.
holmesii (sekvence cílového genu IS481, hIS1001) vzorků nasofaryngeálních
výtěrů (odběrový tampon Flocked Swab FLOQSwabs® 553C) v transportním
médiu eNAT® (transportní médium eNAT® Ref. 608C, COPAN Italia s.p.a.).
Odebírejte a skladujte vzorky, jak je uvedeno v pokynech od výrobce [3].
V případě, že vzorek není zpracován ihned po odběru, budou nukleové
kyseliny uchovávány v transportním médiu eNAT® po dobu až 4 týdnů při
pokojové teplotě a při teplotě 4 °C, a až 6 měsíců při teplotě –20 až –80 °C
(viz návod k použití transportního média eNAT® [3]).
Příprava vzorku
Použijte flexibilní stěrovou tyčinku COPAN FLOQSwabs® pro odběr nasofa-
ryngeálního vzorku pacienta. Každý stěr je přenesen do 1 ml transportního
média eNAT®. Zlomte tyčinku a zavřete zkumavku. Protřepejte zkumavku
obsahující vzorek ze stěru v médiu eNAT®, aby došlo k homogenizaci (nesmí
ale dojít ke zpěnění). Naplňte 300 μl homogenizovaného vzorku do vstupu
pro vzorky na kazetě a zavřete víčko kazety. Vložte kazetu do analyzátoru
Vivalytic one.
Nepoužívejte viskózní vzorky, které se obtížně pipetují.
Výsledek testu
Po automatickém zpracování vzorku analyzátorem Vivalytic one se výsledek
testu zobrazí na obrazovce přístroje. Doba k dosažení výsledku je cca 50 min.
U vzorků s vysokým titrem jsou výsledky k dispozici za méně než 33 minut
a běh testu lze ukončit dříve (viz kapitola Ukončení testu).
Vzorky jsou klasifikovány jako B. pertussis pozitivní, B. parapertussis pozitivní,
B. holmesii pozitivní, negativní, nebo neplatné, případně kombinace výše
uvedeného. V případě pozitivní detekce jednoho či více cílů je test považován
za platný, i když je kontrola Human Control negativní.
Detekce kontroly celého procesu na bázi lidských buněk (Human Control)
u negativních vzorků prokazuje úspěšnou purifikaci DNA a amplifikaci a vy-
lučuje inhibici reakce PCR. Interpretace výsledků je uvedena v následující
tabulce.
95
Publicité
