Publicité
Vivalytic Bordetella
– lietošanas norādījumi
Reaģenti
Visi parauga apstrādei nepieciešamie reaģenti ir iekļauti kasetē. Apstrāde
ietver šūnu lizēšanu, nukleīnskābju ekstrakciju, DNS amplifikāciju un noteik-
šanu.
Tiek izmantoti šādi reaģenti: PĶR pērlīte, saistīšanas buferšķīdums, mazgā-
šanas buferšķīdums un eluācijas buferšķīdums. PĶR pērlītē ir DNS polimerā-
ze, praimeri un zondes. Saistīšanas buferšķīdums nodrošina nukleīnskābju
saistīšanu attīrīšanas procesa laikā. Mazgāšanas buferšķīdums ir dažādu
sāļu un šķīdinātāju preparāts, ko ekstrakcijas procesa laikā izmanto, lai
atbrīvotos no tādiem sārņiem kā olbaltumvielas. Eluācijas buferšķīdumam ir
buferviela ar zemu sāls saturu, kas ekstrakcijas procesa beigās satur attīrītās
nukleīnskābes.
Parauga veids/barotne
Tests ir paredzēts B. pertussis (mērķa gēna sekvence IS481), B. parapertussis
(mērķa gēna sekvence pIS1001) un B. holmesii (mērķa gēna sekvences
IS481, hIS1001) nukleīnskābju noteikšanai nazofaringeālās uztriepes
paraugos (ņemti ar lokano Flocked Swab FLOQSwabs® 553C) eNAT®
transportēšanas barotnē (eNAT® transportēšanas barotne nr. 608C, COPAN
Italia s.p.a.).
Paraugi ir jāņem un jāuzglabā atbilstoši ražotāja norādījumiem [3].
Ja paraugs netiek apstrādāts uzreiz pēc tā ņemšanas, nukleīnskābes
saglabājas eNAT® transportēšanas barotnē līdz 4 nedēļām istabas
temperatūrā un 4 °C temperatūrā, un līdz 6 mēnešiem no –20 °C līdz
–80 °C temperatūrā (skatiet eNAT® transportēšanas barotnes lietošanas
norādījumus [3]).
Paraugu sagatavošana
Izmantojiet lokano COPAN FLOQSwabs® kociņu nazofaringeālo uztriepju
paraugu ņemšanai. Katrs kociņš ir jāievieto 1 ml eNAT® transportēšanas
barotnē. Nolauziet kātiņu un noslēdziet mēģeni. Sakratiet parauga mēģeni,
kurā ir uztriepes paraugs eNAT® barotnē, lai nodrošinātu parauga homoge-
nizāciju (izvairieties no putu veidošanās). Iepildiet kasetes parauga atverē
300 μl homogenizētā parauga un aizveriet kasetes vāciņu. Ievietojiet kaseti
Vivalytic one analizatorā.
Neizmantojiet viskozus paraugus, kuru pipetēšana ir apgrūtināta.
Testa rezultāts
Pēc automātiskas parauga apstrādes ar analizatoru Vivalytic one testa
rezultāts tiek parādīts analizatora Vivalytic one ekrānā. Rezultāta sasniegša-
nas laiks ir aptuveni 50 min. Augsta titra paraugiem rezultāti ir pieejami pēc
mazāk nekā 33 min, un testa veikšanu var beigt ātrāk (skatiet nodaļu "Testa
pārtraukšana").
Paraugu klasificē kā B. pertussis pozitīvu, B. parapertussis pozitīvu, B. holme-
sii pozitīvu, negatīvu vai nederīgu vai kā iepriekš minēto rezultātu kombi-
nāciju. Viena vai vairāku mērķa patogēnu pozitīvas noteikšanas gadījumā
tests tiek uzskatīts par derīgu pat tad, ja cilvēka izcelsmes kontrolmateriāla
(Human Control) rezultāts ir negatīvs.
No cilvēka šūnām radītās visa procesa kontroles (cilvēka izcelsmes kontrol-
materiāls (Human Control)) noteikšana negatīvos paraugos norāda uz sekmī-
gu DNS attīrīšanas un amplifikācijas procedūru un apstiprina, ka nav notikusi
PĶR reakcijas inhibīcija. Rezultātu interpretācija ir parādīta nākamajā tabulā.
81
Publicité
