Publicité
Vivalytic Bordetella
– Instrucțiuni de utilizare
Reactivi
Toți reactivii necesari procesării probei sunt integrați în cartuș. Procesarea
include liza celulară, extracția acidului nucleic, amplificarea și detectarea
ADN.
Reactivii sunt bile PCR, soluție tampon de legare, soluție tampon de spălare
și soluție tampon de eluție. Bila PCR conține ADN polimerază, primeri și
sonde. Soluția tampon de legare facilitează legarea acizilor nucleici în timpul
procesului de purificare. Soluția tampon de spălare este o formulă de săruri
diferite și solvenți diferiți concepută pentru a elimina impuritățile, de exem-
plu, proteinele, în timpul procesului de extracție. Soluția tampon de eluție
este o soluție tampon cu conținut redus de sare și conține acizii nucleici
purificați la sfârșitul procesului de extracție.
Tipuri de probă/Mediu
Testul este destinat detectării acizilor nucleici de B. pertussis (secvența
țintă a genei IS481), B. parapertussis (secvența țintă a genei pIS1001) și
B. holmesii (secvența țintă a genei IS481, hIS1001) în probe de tampon
nazofaringian (tampon flocat flexibil FLOQSwabs® 553C flexibil) în mediu
de transport eNAT® (mediu de transport eNAT® ref. 608C, COPAN Italia
s.p.a.).
Recoltați și depozitați probele așa cum este indicat în instrucțiunile
producătorului [3].
În cazul în care proba nu este procesată imediat după recoltare, acizii
nucleici vor fi conservați în mediu de transport eNAT® pentru până la
4 săptămâni la temperatura camerei și la 4 °C și până la 6 luni la între –20 °C
și –80 °C (consultați instrucțiunile de utilizare pentru mediul de transport
eNAT® [3]).
Pregătirea probei
Utilizați un tampon flexibil COPAN FLOQSwabs® pentru recoltarea probelor
de tampoane nazofaringiene. Fiecare tampon este transferat într-un mediu
de transport eNAT® de 1 ml. Rupeți tamponul și închideți eprubeta. Agitați
eprubeta cu proba de tampon în mediu eNAT® în vederea omogenizării
(evitați spumarea). Introduceți 300 μl de probă omogenizată în comparti-
mentul pentru probă al cartușului și închideți capacul cartușului. Introduceți
cartușul în analizorul Vivalytic one.
Nu utilizați probe vâscoase care sunt dificil de pipetat.
Rezultatul testului
După procesarea automată a probei cu analizorul Vivalytic one, rezultatul
testului este afișat pe ecranul analizorului Vivalytic one. Durata până la obți-
nerea rezultatului este de aproximativ 50 de minute. Pentru probele cu titruri
ridicate, rezultatele sunt disponibile după mai puțin de 33 de minute, iar
testul poate fi încheiat mai repede (consultați capitolul Terminarea testului).
Proba este clasificată ca fiind pozitivă pentru B. pertussis, pozitivă pentru
B. parapertussis, pozitivă, negativă sau nevalidă pentru B. holmesii sau o
combinație a celor menționate mai sus. În cazul detectării pozitive a uneia
sau a mai multor ținte, testul este considerat valid chiar dacă Human Control
este negativ.
Întregul proces de control bazat pe detectarea celulelor umane (Human
Control) în probele negative arată o procedură de amplificare și de purificare
ADN reușită și exclude o inhibare a reacției PCR. Interpretarea rezultatelor
este afișată în tabelul de mai jos.
116
Publicité
