Publicité
Vivalytic Bordetella
– návod na použitie
Reagencie
Všetky reagencie potrebné na spracovanie vzorky sú integrované do kazety.
Spracovanie zahŕňa lýzu buniek, extrakciu nukleovej kyseliny, amplifikáciu
DNA a detekciu.
Reagencie sú PCR guľôčky, väzbový pufer, premývací pufer a elučný pufer.
PCR guľôčka obsahuje DNA polymerázu, primery a próby. Väzbový pufer
uľahčuje väzbu nukleových kyselín počas purifikačného procesu. Premýva-
cí pufer je prípravok zložený z rôznych solí a rozpúšťadiel na odstránenie
nečistôt, napr. proteínov, počas extrakčného procesu. Elučný pufer je pufer
s nízkym obsahom soli a obsahuje purifikované nukleové kyseliny na konci
extrakčného procesu.
Typy vzorky/médium
Test je určený na detekciu nukleových kyselín B. pertussis (cieľová génová
sekvencia IS481), B. parapertussis (cieľová génová sekvencia pIS1001)
a B. holmesii (cieľové génové sekvencie IS481, hIS1001) zo vzoriek
výterov z nosohltana (ohybné tampónové tyčinky FLOQSwabs® 553C)
v transportnom médiu eNAT® (transportné médium eNAT® ref. 608C, COPAN
Italia s.p.a.).
Vzorky odoberajte a skladujte podľa pokynov výrobcu [3].
V prípade, že sa vzorka nespracuje ihneď po odbere, nukleové kyseliny sa
uchovávajú v transportnom médiu eNAT® až 4 týždne pri izbovej teplote
a pri 4 °C a až 6 mesiacov pri –20 °C až –80 °C (pozri návod na použitie
transportného média eNAT® [3]).
Príprava vzorky
Na odber vzoriek z nosohltana od pacientov použite ohybnú tampónovú
tyčinku COPAN FLOQSwabs®. Každú tampónovú tyčinku preneste do 1 ml
transportného média eNAT®. Zlomte tampónovú tyčinku a zatvorte skúmav-
ku. Skúmavku so vzorkou na tampónovej tyčinke v médiu eNAT® pretrepte,
aby sa homogenizovala (zabráňte vytvoreniu peny). Umiestnite 300 μl
homogenizovanej vzorky do otvoru na vzorky na kazete a zatvorte veko kazety.
Kazetu vložte do analyzátora Vivalytic one.
Nepoužívajte viskózne vzorky, ktoré sa ťažko pipetujú.
Výsledok testu
Po automatickom spracovaní vzorky analyzátorom Vivalytic one sa výsledok
testu zobrazí na obrazovke analyzátora Vivalytic one. Časový interval na
získanie výsledku je zhruba 50 min. Výsledky pre vzorky s vysokým titrom
sú k dispozícii za menej než 33 min a testovanie sa môže ukončiť skôr (pozri
kapitolu Ukončenie testu).
Vzorka je klasifikovaná buď ako B. pertussis pozitívna, B. parapertussis pozi-
tívna, B. holmesii pozitívna, negatívna alebo neplatná, alebo ako kombinácia
vyššie uvedených. V prípade pozitívnej detekcie jedného alebo viacerých
cieľov sa test považuje za platný, aj keď je kontrola Human Control negatívna.
Detekcia kontroly celého procesu na báze ľudských buniek (Human Control)
v negatívnych vzorkách preukazuje úspešný postup purifikácie a amplifikácie
DNA a vylučuje inhibíciu reakcie PCR. Interpretácia výsledkov je uvedená v
tabuľke nižšie.
102
Publicité
