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Vivalytic Bordetella
– Instrucciones de uso
Evaluación del rendimiento analítico
Sensibilidad analítica (límite de detección)
El límite de detección (LoD) de la prueba Vivalytic Bordetella se determinó
con la concentración más baja de analito que puede detectarse de manera
constante (≥ 95 % de muestras analizadas en condiciones rutinarias de
laboratorio con un tipo definido de muestra, tabla 1).
Inclusividad
Para evaluar la inclusividad, se realizó un análisis in silico (alineación
BLAST) de la secuencia genómica de diferentes cepas relevantes de Bor-
detella pertussis, Bordetella parapertussis y Bordetella holmesii con relación
a la secuencia de los cebadores de PCR y la sonda de hidrólisis utilizados
en la prueba Vivalytic Bordetella para la amplificación y detección de los
patógenos respectivos. Se determinó la inclusividad para los organismos
incluidos en la tabla 2.
Exclusividad/Especificidad analítica
Para descartar la reactividad cruzada (exclusividad), se llevó a cabo un aná-
lisis in silico (alineación BLAST) de la región diana de Bordetella pertussis,
Bordetella parapertussis y Bordetella holmesii con relación a la secuencia ge-
nómica de otros patógenos distintos representativos de patógenos respirato-
rios comunes o de especies estrechamente relacionadas. Para el sistema
de detección de Bordetella pertussis se pudieron detectar secuencias coin-
cidentes en el área de la sonda y los cebadores para las cepas NCTC10543,
MBORD731, NCTC8344, E001, MBORD595 de Bordetella bronchispetica,
lo que sugiere una posible amplificación. Para el sistema de detección de
Bordetella parapertussis se pudieron detectar secuencias coincidentes en
el área de la sonda y los cebadores para las cepas KM22, BB5, FR3523,
FR2017, FR3823 de Bordetella bronchispetica, lo que sugiere una posible
amplificación. No hubo evidencia alguna de interferencias para el sistema de
detección de Bordetella holmesii (tabla 3).
Reproducibilidad
La reproducibilidad de la prueba Vivalytic Bordetella se estableció con un
panel de 3 concentraciones distintas de Bordetella pertussis, Bordetella para-
pertussis y Bordetella holmesii. En los 3 centros de prueba, el mismo opera-
dor se encargó de analizar cada mezcla en el mismo conjunto de instrumen-
tos Vivalytic utilizando 3 lotes en 4 réplicas durante 3 días, respectivamente.
Las tasas de positividad obtenidas para las distintas combinaciones mostra-
ron correlación con la tasa de positividad esperada (tabla 4a).
Repetibilidad
La repetibilidad de la prueba Vivalytic Bordetella se estableció con un panel
de 1 concentración (3 × c95) de Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis
y Bordetella holmesii. Un mismo operador, en 1 centro de prueba, se encargó
de analizar la mezcla en el mismo conjunto de instrumentos Vivalytic utili-
zando 3 LOTES en 20 réplicas, respectivamente, obteniendo así un total de
60 observaciones por patógeno diana. Las tasas de positividad obtenidas
para las distintas combinaciones mostraron correlación con la tasa de posi-
tividad esperada (tabla 4b).
Interferencias
Se evaluaron las interferencias causadas por sustancias endógenas y exó-
genas que podrían estar presentes en la muestra del paciente. Consulte la
tabla 5 para conocer las sustancias que pueden interferir con la prueba. No
se detectaron interferencias.
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