Publicité
„Vivalytic Bordetella"
– naudojimo instrukcijos
Reagentai
Visi mėginiams apdoroti būtini reagentai jau yra kasetėje. Apdorojimo metu
atliekama ląstelių lizė, nukleino rūgščių išgavimas, DNR amplifikacija ir
aptikimas.
Naudojami tokie reagentai kaip PGR sfera, rišamasis buferinis tirpalas,
plovimo buferinis tirpalas ir eliucijos buferinis tirpalas. PGR sferoje yra DNR
polimerazės, pradmenų ir zondų. Rišamasis buferinis tirpalas gryninimo
proceso metu padeda prisijungti nukleorūgštims. Plovimo buferinis tirpalas
– tai įvairių druskų ir tirpiklių mišinys, skirtas nešvarumams, pvz., balty-
mams, pašalinti išgavimo proceso metu. Eliucijos buferinis tirpalas – mažai
druskingas buferinis tirpalas, kurio sudėtyje yra išgrynintų nukleorūgščių,
gautų išgavimo proceso pabaigoje.
Mėginio tipai / terpė
Tyrimas skirtas B. pertussis (geno taikinio seka IS481), B. parapertussis
(geno taikinio seka pIS1001) ir B. holmesii (geno tikslinės sekos IS481,
hIS1001) aptikti nosiaryklės tepinėlių mėginiuose (lankstieji flokuoti
tamponai FLOQSwabs® 553C") „eNAT®" transportavimo terpėje („eNAT®"
transportavimo terpė, Nr. 608C, „COPAN Italia s.p.a.").
Mėginius imkite ir laikykite taip, kaip nurodyta gamintojo duomenų lape [3].
Jei mėginys neapdorojamas iš karto paėmus mėginį, nukleino rūgštys
bus saugomos „eNAT®" transportavimo terpėje iki 4 savaičių kambario
temperatūroje bei 4 °C temperatūroje ir iki 6 mėnesių nuo –20 °C iki –80 °C
(žr. „eNAT®" transportavimo terpės naudojimo instrukcijas [3]).
Mėginio paruošimas
Norėdami paimti nosiaryklės tamponų mėginius, naudokite lankstų „CO-
PAN FLOQSwabs®" tamponą. Kiekvienas tepinėlio ėmiklis perkeliamas į
1 ml „eNAT®" perkėlimo terpės. Nulaužkite ėmiklį ir užsukite mėgintuvėlį.
Suplakite mėgintuvėlį, kuriame yra tepinėlio mėginys „eNAT®" terpėje, kad
mėginys taptų homogenizuotas (venkite putojimo). 300 μl sumaišyto mėginio
sulašinkite į kasetės mėginio lašinimo vietą ir uždarykite kasetės dangtelį.
Įdėkite kasetę į „Vivalytic one" analizatorių.
Nenaudokite tąsių mėginių, kuriuos sunku lašinti pipete.
Tyrimo rezultatas
„Vivalytic one" analizatoriui automatiškai apdorojus mėginį, tyrimo rezultatai
rodomi „Vivalytic one" analizatoriaus ekrane. Laikas iki rezultato gavimo
yra apie 50 min. Didelio titro mėginių rezultatai pasiekiami po mažiau nei
33 min., o tyrimo eiga gali būti nutraukta anksčiau (žr. skyrių „Tyrimo nutrau-
kimas").
Mėginys klasifikuojamas kaip B. pertussis teigiamas, B. parapertussis tei-
giamas, B. holmesii teigiamas, neigiamas ar nevertinamas arba kaip minėtų
dalykų derinys. Jeigu aptinkamas vienas arba keli tiriamieji mikroorganizmai,
tyrimas laikomas vertinamu, net jeigu neaptinkamos žmogaus kilmės kontro-
linės medžiagos („Human Control").
Jeigu aptinkamos žmogaus ląstelių pagrindo viso proceso kontrolinės
medžiagos („Human Control") neigiamuose mėginiuose, tai reiškia, kad DNR
išgryninimo ir amplifikacijos procedūra buvo sėkminga, o PGR reakcija nebu-
vo slopinama. Rezultatai aiškinami toliau pateikiamoje lentelėje.
74
Publicité
