Publicité
Vivalytic Bordetella
– Kasutusjuhend
Reaktiivid
Kõik proovi töötlemiseks vajalikud reaktiivid on kasseti sees. Töötlus hõlmab
rakkude lõhkumist, nukleiinhappe ekstraheerimist, DNA amplifikatsiooni ja
tuvastamist.
Reagendid on PCR-helmes, sidumispuhver, pesupuhver ja elueerimis-
puhver. PCR-helmes sisaldab DNA-polümeraasi, praimereid ja sonde.
Sidumispuhver lihtsustab nukleiinhapete seondumist puhastusprotsessi
ajal. Pesupuhver koosneb erinevatest sooladest ja lahustest, et eemaldada
ekstraheerimisprotsessi ajal lisandid, näiteks valgud. Elueerimispuhver on
madala soolsusega puhver, mis sisaldab ekstraheerimisprotsessi lõpuks
puhastatud nukleiinhappeid.
Proovi tüübid / sööde
Test on ette nähtud B. pertussis'e (geenide sihtjärjestus IS481), B.
parapertussis'e (geenide sihtjärjestus pIS1001) ja B. holmesii (geenide
sihtjärjestused IS481, hIS1001) nukleiinhapete avastamiseks ninaneelu
tampooniproovidest (painduv ripstampoon FLOQSwabs® 553C) eNAT®
transpordisöötmes (eNAT® transpordisööde Ref. 608C, COPAN Italia s.p.a.).
Koguge ja säilitage proove nii, nagu on näidatud tootja juhistes [3].
Kui proovi ei töödelda kohe pärast proovi kogumist, säilivad nukleiinhapped
eNAT® transpordikeskkonnas kuni 4 nädalat toatemperatuuril ja 4 °C
juures ning kuni 6 kuud temperatuuril –20 °C kuni –80 °C (vt eNAT®
transpordikeskkonna kasutusjuhend [3]).
Proovi ettevalmistamine
Kasutage patsiendilt ninaneeluproovide kogumiseks painduvaid tampoone
COPAN FLOQSwabs®. Iga tampoon tuleb panna 1 ml transpordisöötmesse
eNAT®. Murdke tampoon ja sulgege katsuti. Raputage tampooniproovi sisal-
davat proovikatsutit eNAT® söötme homogeniseerimiseks (vältige vahuta-
mist). Kandke 300 μl homogeniseeritud proovi kasseti proovisüvendisse ja
pange kasseti kaas kinni. Sisestage kassett Vivalytic one analüsaatorisse.
Ärge kasutage viskoosseid proove, mida on keeruline pipeteerida.
Testi tulemus
Pärast proovi automaatset töötlemist Vivalytic one analüsaatoris, kuvatakse
testitulemus Vivalytic one analüsaatori ekraanil. Tulemuse saamiseni kulub
umbes 50 minutit. Kõrge tiitriga proovide puhul on tulemused kättesaadavad
vähem kui 33 minuti pärast ja testimise võib lõpetada varem (vaadake jaotist
„Analüüsi lõpetamine").
Proov liigitatakse kas B. pertussis positiivseks, B. parapertussis positiiv-
seks, B. holmesii positiivseks, negatiivseks või kehtetuks või eelnimetatute
kombinatsiooniks. Juhul kui üks või mitu sihtmärki tuvastatakse positiivselt,
loetakse test kehtivaks isegi siis, kui Human Control on negatiivne.
Inimese rakul põhineva kogu protsessi kontrolli tuvastamine (Human
Control) näitab edukat DNA puhastamist ja amplifikatsiooni protseduuri ning
välistab PCR-reaktsiooni inhibeerimise. Tulemuste tõlgendus on esitatud
allolevas tabelis.
67
Publicité
