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Vivalytic Bordetella
– Instruções de utilização
Princípio de teste
O Vivalytic Bordetella é um teste qualitativo baseado na PCR em tempo real.
Condições de armazenamento e utilização
O produto permanece estável até à data de validade se for armazenado a
uma temperatura entre +15 °C e +25 °C. As condições de armazenamento e
utilização podem ser consultadas no cartucho, na embalagem ou na etiqueta
da caixa. O cartucho tem de ser utilizado a uma temperatura entre +15 °C e
+25 °C, humidade relativa < 65%, no prazo de 15 minutos após a abertura da
embalagem. A embalagem mantém a higiene e evita a perda de desempenho
provocada pela humidade. A exposição prolongada à humidade tem um
impacto negativo no desempenho do teste.
Reagentes
Todos os reagentes necessários para o processamento das amostras estão
incluídos no cartucho. O processamento inclui lise celular, extração de
ácidos nucleicos, amplificação e deteção de ADN.
Os reagentes são esferas de PCR, tampões de ligação, tampões de lavagem
e tampões de eluição. As esferas PCR contêm polimerase de ADN, primers e
sondas. O tampão de ligação facilita a ligação dos ácidos nucleicos durante
o processo de purificação. O tampão de lavagem é uma formulação de
diferentes sais e solventes para remover impurezas, por ex., proteínas durante
o processo de extração. O tampão de eluição é um tampão de baixo teor de
sal e contém os ácidos nucleicos purificados no final do processo de extração.
Tipos/meio de amostra
O teste destina-se a detetar ácidos nucleicos de B. pertussis (sequência
genética alvo IS481), B. parapertussis (sequência genética alvo pIS1001)
e B. holmesii (sequências genéticas alvo IS481, hIS1001) de amostras de
exsudado nasofaríngeo (zaragatoa tufada flexível FLOQSwabs® 553C) em
meio de transporte eNAT® (meio de transporte eNAT® Ref. 608C, COPAN
Italia s.p.a.).
Efetue a colheita de amostras e armazene-as conforme indicado nas
instruções do fabricante [3].
No caso de a amostra não ser processada imediatamente após a colheita da
amostra, os ácidos nucleicos são preservados em meio de transporte eNAT®
durante até 4 semanas à temperatura ambiente e a 4 °C e até 6 meses a
temperaturas desde os –20 °C a –80 °C (consulte as instruções de utilização
do meio de transporte eNAT® [3]).
Preparação da amostra
Utilize uma zaragatoa flexível COPAN FLOQSwabs® para a colheita de amos-
tras de exsudado nasofaríngeo. Cada zaragatoa com exsudado é transferida
para 1 ml de meio de transporte eNAT®. Quebre a zaragatoa e feche o tubo.
Agite o tubo de amostra que contém a amostra de exsudado em meio eNAT®
para homogeneização (evite a formação de espuma). Deite 300 μl de amos-
tra homogeneizada na entrada de amostra do cartucho e feche a tampa do
cartucho. Insira o cartucho no analisador Vivalytic one.
Não utilize amostras viscosas que são difíceis de pipetar.
Resultado do teste
Depois do processamento automático da amostra com o analisador Vivalytic
one, o resultado do teste é indicado no ecrã do analisador Vivalytic one. O
tempo até ao resultado é de aproximadamente 50 min. Para amostras de título
alto, os resultados ficam disponíveis em menos de 33 minutos e a execução
do teste pode ser concluída mais cedo (consulte o capítulo Terminar o teste).
A amostra é classificada como positiva para B. pertussis, positiva para B. pa-
rapertussis, positiva para B. holmesii, negativa ou inválida ou como uma com-
binação das anteriores. No caso de uma deteção positiva de um ou mais alvos
o teste é considerado válido mesmo que o Human Control seja negativo.
A deteção do controlo do processo inteiro baseado em células humanas
(Human Control), em amostras negativas indica um procedimento de purifi-
cação e amplificação de ADN bem-sucedido e exclui uma inibição da reação
PCR. A interpretação dos resultados é indicada na tabela a seguir.
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