Publicité
Vivalytic Bordetella
– Upute za uporabu
Reagensi
Svi reagensi potrebni za obradu uzorka integrirani su u patronu. Obrada uklju-
čuje lizu stanica, ekstrakciju nukleinske kiseline, amplifikaciju i otkrivanje DNK.
Reagensi su PCR kuglica, vezni pufer, pufer za ispiranje i pufer za eluiranje.
PCR kuglica sadrži DNK polimerazu, početnice i probe. Vezni pufer pomaže
u vezivanju nukleinskih kiselina tijekom procesa purifikacije. Pufer za ispira-
nje formula je različitih soli i otapala za uklanjanje nečistoća, npr. proteina
tijekom procesa ekstrakcije. Pufer za eluiranje pufer je s malim udjelom soli
koji sadrži pročišćene nukleinske kiseline na kraju procesa ekstrakcije.
Vrste/medij uzorka
Test je namijenjen za otkrivanje nukleinskih kiselina bakterije B.
pertussis (ciljna sekvenca gena IS481), B. parapertussis (ciljna sekvenca
gena pIS1001) i B. holmesii (ciljna sekvenca gena IS481, hIS1001) iz
nazofaringealnih uzoraka brisa (fleksibilni štapić sa sintetičkim vrhom
FLOQSwabs® 553C) u transportnom mediju eNAT® (transportni medij eNAT®
ref. 608C, COPAN Italia s.p.a.).
Prikupite i pohranite uzorke kao što je naznačeno u uputama proizvođača [3].
U slučaju da se uzorak ne obradi odmah nakon uzimanja uzorka, nukleinske
kiseline čuvat će se u transportnom mediju eNAT® do 4 tjedna na sobnoj
temperaturi i na 4 °C i do 6 mjeseci na –20 °C do –80 °C (pogledajte upute za
uporabu transportnog medija eNAT® [3]).
Priprema uzoraka
Upotrijebite fleksibilni štapić COPAN FLOQSwabs® za prikupljanje nazofarin-
gealnih uzoraka brisa. Svaki se štapić prenosi u 1 ml eNAT® transportnog me-
dija. Slomite štapić i zatvorite epruvetu. Protresite epruvetu s uzorkom koja
sadrži uzorak brisa u mediju za homogenizaciju eNAT® (izbjegavajte stvaranje
pjene). Napunite jažicu za uzorak patrone s 300 μl homogeniziranog uzorka i
zatvorite poklopac patrone. Umetnite patronu u analizator Vivalytic one.
Ne upotrebljavajte viskozne uzorke koji se teško pipetiraju.
Rezultati testa
Nakon automatske obrade uzorka analizatorom Vivalytic one rezultat testa
prikazuje se na zaslonu analizatora Vivalytic one. Vrijeme do rezultata iznosi
oko 50 minuta. Za uzorke visokog titra rezultati su dostupni nakon manje od
33 minute i testiranje se može ranije prekinuti (pogledajte poglavlje Završe-
tak testa).
Uzorak se klasificira kao pozitivan na B. pertussis, pozitivan na B. paraper-
tussis, pozitivan na B. holmesii, negativan ili nevažeći ili kao kombinacija na-
vedenog. U slučaju pozitivnog otkrivanja jednog ili više ciljeva test se smatra
valjanim čak i ako je kontrola Human Control negativna.
Otkrivanje kontrole cijelog postupka temeljene na ljudskim stanicama (Hu-
man Control) u negativnim uzorcima prikazuje uspješnu purifikaciju DNK-a i
proces amplifikacije te isključuje inhibiciju PCR reakcije. Tumačenje rezultata
navedeno je u tablici u nastavku.
123
Publicité
