Publicité
Un Panther Fusion System en temps réel intègre des fluorimètres dans l'incubateur
d'amplification existant pour mesurer les signaux de fluorescence générés pendant
l'amplification pour les tests TMA en temps réel.
Contrôles internes pour les tests Aptima®
Les tests Aptima peuvent utiliser un contrôle interne pour surveiller la capture,
l'amplification et la détection de l'acide nucléique, ainsi que toute erreur de l'opérateur ou
de l'instrument. Le contrôle interne est ajouté à chaque réaction. Le signal du contrôle
interne dans chaque réaction est discriminé du signal cible.
Capture d'acide nucléique
En fonction du flux de travaux, les spécimens sont soit transférés dans un tube de lyse de
spécimen contenant du milieu de transport de spécimen (STM) qui lyse les cellules, libère
l'acide nucléique cible et le protège contre la dégradation pendant le stockage, ou
lorsqu'il est incubé dans un réactif alcalin pour lyser les cellules. Le contrôle interne est
ajouté à chaque spécimen de test et aux contrôles par l'intermédiaire du réactif activateur
Fusion de travail (wFCR). Le contrôle interne dans le réactif permet de suivre le traitement
des échantillons, l'amplification et la détection. Les oligonucléotides de capture
s'hybrident à l'acide nucléique de l'échantillon testé. L'acide nucléique hybridé est alors
séparé du reste de l'échantillon dans un champ magnétique. Les étapes de lavage
permettent d'éliminer les composants exogènes du tube de réaction. L'étape d'élution
permet la récupération de l'acide nucléique purifié. Durant l'étape de capture et d'élution
de l'acide nucléique, la totalité de l'acide nucléique est isolée du spécimen.
Tests Fusion
Les tests Fusion sont réalisés sur le Panther System et utilisent le processus de capture de
l'acide nucléique après isolement de l'acide nucléique de l'échantillon et purification du
produit d'amplification. À l'issue de l'aspiration finale du lavage Mag durant le processus
de capture de cible, les billes sont resuspendues dans le tampon d'élution pour dé-
hybrider la séquence cible des billes. Après cette étape, la MTU est transférée au Fusion
et placée dans la fente d'élution magnétique pour commencer le processus de PCR. Un
tampon de reconstitution adapté au test est ajouté dans le puits dans la cartouche de test
qui contient les billes lyophilisées pour le PCR mastermix. L'huile, l'éluat et le mastermix
reconstitué sont ajoutés dans un tube de réaction qui est ensuite bouché. Le tube bouché
est d'abord transférée dans la centrifugeuse, puis dans le thermocycleur pour
l'amplification et la détection par PCR à l'aide d'un fluorimètre rotatif à cinq (5) canaux.
Réaction en chaîne par polymérase en temps réel multiplex
Les tests Fusion peuvent également utiliser la technologie de réaction en chaîne par
polymérase pour permettre la détection et la différenciation de cibles multiples à partir
d'une seule réaction. Une transcriptase inverse génère une copie ADN de la séquence
cible. Des amorces sens et antisens spécifiques de la cible et des sondes amplifient alors
Manuel de l'opérateur du Panther® / Panther Fusion® System
AW-20220-901 Rév. 001 (FR)
Vue d'ensemble
39
Publicité
