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Vivalytic C. difficile
– Manuel de l'utilisateur
Réactifs
Tous les réactifs nécessaires au traitement des échantillons sont intégrés
dans la cartouche. Le processus comprend la lyse cellulaire, l'extraction
d'acide nucléique, l'amplification et la détection d'ADN.
Les réactifs sont la bille PCR, le tampon de liaison, le tampon de lavage et
le tampon d'élution. La bille PCR contient l'ADN polymérase, les amorces
et les sondes. Le tampon de liaison permet de faciliter la liaison des acides
nucléiques au cours du processus de purification. Le tampon de lavage est
une formulation de différents sels et solvants permettant d'éliminer les
impuretés, notamment les protéines au cours du processus d'extraction. Le
tampon d'élution est un tampon à faible teneur en sel contenant les acides
nucléiques purifiés au terme du processus d'extraction.
Types/milieu dʼéchantillon
Le test est destiné à être utilisé avec des échantillons sur écouvillons de
selles dans le milieu eNAT® (écouvillon floqué ordinaire FLOQSwabs® 552C,
milieu de transport eNAT® réf. 606C, COPAN Italia s.p.a.).
Prélevez et stockez les échantillons comme indiqué dans les instructions du
fabricant.
Si jamais l'échantillon n'est pas traité immédiatement après le prélèvement
d'échantillon, les acides nucléiques seront conservés dans le milieu de
transport eNAT® jusqu'à 4 semaines à température ambiante et à 4 °C et
jusqu'à 6 mois entre -20 °C et -80 °C (voir le manuel de l'utilisateur du milieu
de transport eNAT®
).
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Préparation des échantillons
Utilisez un écouvillon floqué ordinaire FLOQSwabs® (COPAN Italia s.p.a.)
pour prélever une petite quantité de selles en insérant l'embout de l'écou-
villon floqué dans l'échantillon de selles et en le faisant tourner. Les zones
sanguinolentes, visqueuses ou liquides des selles doivent être sélection-
nées et prélevées. Après le prélèvement, examinez l'écouvillon pour vous as-
surer que de la matière fécale est visible sur l'embout. Si ce n'est pas le cas,
insérez à nouveau l'écouvillon floqué dans l'échantillon de selles et faites-le
tourner en vous assurant que toute la zone de l'embout de l'écouvillon est
en contact avec l'échantillon. Après avoir prélevé l'écouvillon, transférez
l'écouvillon sur le tube Copan eNAT® de 2 ml avec le milieu de transport
eNAT®. Maintenez la tige de l'écouvillon entre le pouce et l'index, écrasez
et mélangez l'échantillon de selles contre le côté du tube pour répartir
uniformément et suspendre l'échantillon dans le milieu de conservation.
Maintenez la tige de l'écouvillon près du bord du tube, pliez-la à un angle
de 180 degrés pour la rompre au niveau du point de rupture marqué. Jetez
la partie supérieure rompue de la tige de l'écouvillon et serrez le capuchon.
Agitez le tube échantillon contenant l'échantillon prélevé sur écouvillon et
le milieu eNAT® (COPAN Italia s.p.a.) vigoureusement pour homogénéiser
le mélange, puis utilisez une pipette pour ajouter 300 μl d'échantillon de
patient homogénéisé dans l'entrée échantillon de la cartouche.
N'utilisez pas d'échantillons visqueux difficiles à pipeter.
Résultat du test
Après le traitement automatique des échantillons à l'aide de l'analyseur
Vivalytic one, les résultats de test sont affichés à l'écran de l'analyseur Viva-
lytic one. Le délai d'obtention du résultat est d'environ 50 minutes. Pour les
échantillons à titre élevé, les résultats sont disponibles en moins de 35 min.
et le test peut être clôturé plus tôt (voir le chapitre Fin du test).
L'échantillon est classé comme étant positif à C. difficile, négatif à C. difficile
ou invalide. En cas de détection positive de C. difficile, le test est considéré
valide même si le Human Control est négatif.
La détection de la cellule humaine basée sur le contrôle du processus com-
plet (Human Control) dans les échantillons négatifs indique une procédure
d'extraction réussie et exclut une inhibition de la réaction PCR. L'interpréta-
tion des résultats est fournie dans le tableau ci-dessous.
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