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sondas. O tampão de ligação facilita a ligação dos ácidos nucleicos durante
o processo de purificação. O tampão de lavagem é uma formulação de
diferentes sais e solventes para remover impurezas, por ex., proteínas durante
o processo de extração. O tampão de eluição é um tampão de baixo teor de
sal e contém os ácidos nucleicos purificados no final do processo de extração.
Tipos/meio de amostra
O teste foi concebido para ser usado com amostras de exsudado de fezes
em meio eNAT® (zaragatoa tufada regular FLOQSwabs® 552C, meio de trans-
porte eNAT® Ref. 606C, COPAN Italia s.p.a.).
Efetue a colheita de amostras e armazene-as conforme indicado nas instru-
ções do fabricante.
No caso de a amostra não ser processada imediatamente após a colheita da
amostra, os ácidos nucleicos são preservados em meio de transporte eNAT®
durante até 4 semanas à temperatura ambiente e a 4 °C e até 6 meses a
temperaturas desde os -20 °C a -80 °C (consulte as Instruções de utilização
do meio de transporte eNAT®
Preparação da amostra
Use uma zaragatoa tufada regular FLOQSwabs® (COPAN Italia s.p.a.) para
colher uma pequena quantidade de fezes, inserindo a ponta da zaragatoa
tufada na amostra de fezes e rodando-a. Deve ser escolhida e colhida a área
ensanguentada, viscosa ou aguada das fezes. Depois da colheita, examine o
exsudado para garantir que existe material fecal visível na ponta. Caso não
exista, volte a inserir a zaragatoa tufada na amostra de fezes e rode, tendo o
cuidado de toda a área da ponta da zaragatoa estar em contacto com a amos-
tra. Depois da colheita, transfira a zaragatoa para o tubo de 2 ml Copan eNAT®
com meio de transporte eNAT®. Segure na haste da zaragatoa entre o polegar e
o indicador, esmague e misture a amostra de fezes contra o lado do tubo para
dispersar e suspender a amostra de forma uniforme no meio de conservação.
Segure na haste da zaragatoa perto da borda do tubo, dobre-a num ângulo de
180 graus para parti-la no ponto de quebra marcado. Deite fora a parte supe-
rior partida da haste da zaragatoa e aperte a tampa. Agite o tubo de amostra
que contém a amostra de exsudado e o meio eNAT® (COPAN Italia s.p.a.) muito
bem para homogeneização e use um pipetador para encher 300 μl de amostra
do paciente homogeneizada na entrada de amostra do cartucho.
Não utilize amostras viscosas que são difíceis de pipetar.
Resultado do teste
Depois do processamento automático da amostra com o analisador Vivaly-
tic one, o resultado do teste é indicado no ecrã do analisador Vivalytic one.
O tempo até ao resultado é de cerca de 50 min. Para espécimes de titulação
alta, os resultados ficam disponíveis passados menos de 35 minutos e a exe-
cução do teste pode ser concluída mais cedo (consulte o capítulo Terminar
o teste).
A amostra é classificada como sendo positiva para C. difficile, negativa para
C. difficile ou inválida. No caso de uma deteção positiva de C. difficile, o teste
é considerado válido mesmo se o Human Control for negativo.
Em amostras negativas, a deteção do controlo do processo inteiro baseado
em células humanas (Human Control), indica um procedimento de extração
bem-sucedido e exclui uma inibição da reação PCR. A interpretação dos
resultados é indicada na tabela a seguir.
C. difficile
Human
(tcdA/tcdB)
Control
+
+/–
–
–
Recomenda-se a repetição do teste.
1
Vivalytic C. difficile
).
5
Validade
válido
+
válido
–
inválido
– Instruções de utilização
Resultado
A amostra é considerada positiva para C. difficile
(detetado o gene de toxina tcdA/tcdB).
A amostra é considerada negativa para C. difficile
(detetado o gene de toxina tcdA/tcdB)
Não pode ser avaliado.
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