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Os reagentes são esferas de PCR, tampões de ligação, tampões de lavagem
e tampões de eluição. As esferas PCR contêm polimerase de ADN, primers
e sondas. O tampão de ligação facilita a ligação dos ácidos nucleicos du-
rante o processo de purificação. O tampão de lavagem é uma formulação
de diferentes sais e solventes para remover impurezas, por ex., proteínas
durante o processo de extração. O tampão de eluição é um tampão de baixo
teor de sal e contém os ácidos nucleicos purificados no final do processo de
extração.
Tipos/meio de amostra
O teste foi concebido para ser usado com amostras de exsudado de fezes
em meio eNAT® (zaragatoa tufada regular FLOQSwabs® 552C, meio de trans-
porte eNAT® Ref. 606C, COPAN Italia s.p.a.).
Efetue a colheita de amostras e armazene-as conforme indicado nas instru-
ções do fabricante.
No caso de a amostra não ser processada imediatamente após a colheita
da amostra, os ácidos nucleicos serão preservados em meio de transporte
eNAT® durante até 4 semanas à temperatura ambiente e a 4 °C e até 6 meses
a temperaturas desde os -20 °C a -80 °C (consulte as Instruções de utiliza-
ção do meio de transporte eNAT®
Preparação da amostra
Use uma zaragatoa tufada regular FLOQSwabs® (COPAN Italia s.p.a.) para
colher uma pequena quantidade de fezes, inserindo a ponta da zaragatoa
tufada na amostra de fezes e rodando-a. Deve ser escolhida e colhida a área
ensanguentada, viscosa ou aguada das fezes. Depois da colheita, examine o
exsudado para garantir que existe material fecal visível na ponta. Caso não
exista, volte a inserir a zaragatoa tufada na amostra de fezes e rode, tendo
o cuidado de toda a área da ponta da zaragatoa estar em contacto com a
amostra. Certifique-se de que a zaragatoa está apenas coberta com fezes e
remova o excesso de fezes rodando suavemente a zaragatoa contra o rebor-
do da amostra. Depois da colheita, transfira a zaragatoa para o tubo de 2 ml
Copan eNAT® com meio de transporte eNAT®. Segure na haste da zaragatoa
entre o polegar e o indicador, esmague e misture a amostra de fezes contra
o lado do tubo para dispersar e suspender a amostra de forma uniforme no
meio de conservação. Segure na haste da zaragatoa perto da borda do tubo,
dobre-a num ângulo de 180 graus para parti-la no ponto de quebra marcado.
Deite fora a parte superior partida da haste da zaragatoa e aperte a tampa.
Agite muito bem o tubo de amostra que contém a amostra de exsudado e
o meio eNAT® (COPAN Italia s.p.a.) durante pelo menos 10 segundos para
homogeneização. Utilize um pipetador para encher 300 μl de amostra do
paciente homogeneizada na entrada de amostra do cartucho. Certifique-se
de que pipeta apenas a partir do sobrenadante (parte superior da amostra)
para evitar o transporte de partículas de fezes. No caso de uma quantidade
excessiva de partículas na amostra, recomenda-se que o tubo de amostra
seja colocado numa superfície plana e esperar que as partículas sedimen-
tem durante 5 minutos.
Não utilize amostras viscosas que são difíceis de pipetar.
Resultado do teste
Depois do processamento automático da amostra com o analisador Vivalytic
one, o resultado do teste é indicado no ecrã do analisador Vivalytic one. O
tempo até ao resultado é de aproximadamente 58 min. Para amostras de
título alto, os resultados ficam disponíveis em menos de 44 minutos e a exe-
cução do teste pode ser concluída mais cedo (consulte o capítulo Terminar
o teste).
A amostra é classificada como positiva para Norovírus, negativa para Noro-
vírus ou inválida. No caso de uma deteção positiva para Norovírus, o teste é
considerado válido mesmo que o Human Control seja negativo.
Em amostras negativas, a deteção do controlo do processo inteiro baseado
em células humanas (Human Control), indica um procedimento de extração
bem-sucedido e exclui uma inibição da reação PCR. A interpretação dos re-
sultados é indicada na tabela a seguir.
Vivalytic Norovirus
).
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– Instruções de utilização
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