3M Molecular Detection Assay 2 Manuel D'instructions page 24

5.2 Répéter l'étape 5.1 jusqu'à ce que chaque lysat d'échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactif
correspondant dans la barrette.
5.3 Refermer les tubes de réactif avec les bouchons supplémentaires fournis et utiliser le côté arrondi de l'Outil
d'ouverture/fermeture pour système de détection moléculaire 3M – Réactif afin d'exercer une pression d'avant en
arrière pour s'assurer que le tube est correctement fermé.
5.4 Répéter l'étape 5.1 au besoin, en fonction du nombre d'échantillons à tester.
5.5 Lorsque tous les lysats d'échantillons ont été transférés, répéter l'étape 5.1 afin de transférer 20 µl de lysat de NC
dans un tube de réactif.
5.6 Transférer 20 µl de lysat de NC dans un tube de RC. Incliner la pipette pour ne pas agiter les pastilles. Mélanger
en effectuant 5 cycles d'aspiration/refoulement avec la pipette.
6. Charger les tubes recouverts d'un bouchon dans un Plateau de chargement rapide pour système de détection
moléculaire 3M propre et décontaminé. Fermer et verrouiller le couvercle du Plateau de chargement rapide pour
système de détection moléculaire 3M.
7. Examiner et confirmer l'analyse configurée sur le Logiciel de détection moléculaire 3M.
8. Cliquer sur le bouton Démarrer du logiciel et sélectionner l'instrument à utiliser. Le couvercle de l'appareil sélectionné
s'ouvre automatiquement.
9. Placer le Plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M dans l'Instrument de détection
moléculaire 3M et fermer le couvercle pour lancer l'essai. Les résultats sont obtenus en 75 minutes ; toutefois, les
résultats positifs peuvent être détectés plus tôt.
10. Une fois l'analyse terminée, retirer le Plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M de
l'Instrument de détection moléculaire 3M et tremper les tubes dans une solution d'eau de Javel à 1-5 % (v:v dans de
l'eau) pendant 1 heure, et ce à l'écart de la zone de préparation des analyses.
Avis : Pour réduire le risque de résultats faux positifs dus à la contamination croisée, ne jamais ouvrir les tubes de réactif
contenant de l'ADN amplifié. Cela comprend les tubes de Contrôle de réactif, de Réactif et de Contrôle de matrice.
Toujours éliminer les tubes de réactif fermés en les trempant dans une solution d'eau de Javel à 1-5 % (v:v dans de l'eau)
pendant 1 heure, et ce à l'écart de la zone de préparation des analyses.
Résultats et interprétation
Un algorithme interprète la courbe de résultats lumineuse provenant de la détection de l'amplification de l'acide nucléique.
Les résultats sont automatiquement analysés par le logiciel et sont codés par couleur en fonction du résultat. Le logiciel
identifie les résultats positifs ou négatifs en analysant un certain nombre de paramètres uniques en ce qui concerne la
courbe. Les résultats présumés positifs sont rapportés en temps réel tandis que les résultats négatifs ou à vérifier sont
affichés à la fin de l'essai.
Les résultats présumés positifs doivent être confirmés selon les procédures standard des laboratoires ou en suivant
la confirmation de la méthode de référence appropriée
enrichissement dans les bouillons de second enrichissement (le cas échéant), puis un étalement et une confirmation des
isolats au moyen des méthodes biochimiques et sérologiques appropriées.
Dans le cadre de la validation NF, tous les échantillons identifiés comme étant positifs par le Kit de détection moléculaire
Listeria sp 3M version 2 doivent être confirmés par l'un des tests suivants :
Option 1 : Au moyen des normes ISO 11290-1
Option 2 : Implémentation d'une méthode de confirmation consistant à : Transférer 0,1 ml de Bouillon demi-Fraser. Tracer
directement sur la gélose sélective comme indiqué dans la norme ISO 11290-1
Option 3 : Au moyen de sondes d'acide nucléique, comme indiqué dans la norme EN ISO 7218
partir de gélose sélective (voir les options 1 et 2).
Option 4 : Au moyen d'une autre méthode certifiée par la validation NF, dont le principe doit être différent du Kit de
détection moléculaire Listeria 3M version 2. Le protocole complet décrit pour cette seconde méthode validée doit être
utilisé. Toutes les étapes précédant le début de la confirmation doivent être communes aux deux méthodes.
20 µL
, en commençant par effectuer un transfert du premier
(1, 2, 3)
en commençant par l'enrichissement demi-Fraser
(3)
11
FR (Français)
.
(3)
, sur des colonies isolées, à
(5)