3M Molecular Detection Assay 2 Manuel D'instructions page 159

5.3 Zamknąć probówki reagenta dołączonym dodatkowym korkiem i przy pomocy zaokrąglonej strony narzędzia 3M
do zakładania/zdejmowania korków probówek reagenta do diagnostyki molekularnej docisnąć korek, ruszając nim
w przód i w tył, by upewnić się, że jest szczelnie dociśnięty.
5.4 Krok 5.1 należy powtórzyć w miarę potrzeb dla wszystkich próbek poddawanych badaniu.
5.5 Po przeniesieniu lizatów wszystkich próbek powtórzyć etap 5.1, by przenieść 20 µl lizatu KU do probówki reagenta.
5.6 Przenieść 20 µl lizatu KN do probówki SR. Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić do wstrząśnięcia granulek.
Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.
6. Zatkane probówki należy umieścić na czystej i odkażonej tacy 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do
diagnostyki molekularnej. Zamknąć i zablokować pokrywę tacy 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do
diagnostyki molekularnej.
7. W oprogramowaniu 3M do diagnostyki molekularnej sprawdzić i potwierdzić konfigurację analizy.
8. Kliknąć przycisk Start w programie i wybrać używane urządzenie. Nastąpi automatyczne otwarcie pokrywy wybranego
urządzenia.
9. Aby rozpocząć analizę, należy umieścić tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
w urządzeniu 3M do diagnostyki molekularnej i zamknąć pokrywę. Na wyniki trzeba poczekać 75 minut, choć wyniki
pozytywne można uzyskać wcześniej.
10. Po zakończeniu testu należy wyjąć tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
z urządzenia 3M do diagnostyki molekularnej i zutylizować probówki, namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym)
roztworze domowego wybielacza przez 1 godzinę i usuwając z obszaru przygotowania testów.
Wana informacja: Aby zminimalizować ryzyko otrzymania wyników fałszywie dodatnich w związku z zanieczyszczeniem
krzyżowym, nie należy otwierać probówek z reagentem zawierających DNA po amplifikacji. Dotyczy to probówek z
kontrolą reagenta, reagentem i kontrolą macierzy. Zanieczyszczone uszczelnione próbówki reagenta należy utylizować,
namaczając je w 1–5% (obj./obj.; wodnym) roztworze domowego wybielacza przez 1 godzinę i wynosząc poza obszar
przygotowania testów.
Wyniki i interpretacja
Algorytm interpretuje krzywą strumienia świetlnego powstałego w wyniku wykrycia amplifikacji kwasu nukleinowego.
Oprogramowanie prowadzi automatyczną analizę wyników oraz koduje je odpowiednimi kolorami. Wynik dodani lub
ujemny określa się przez analizę wielu określonych niepowtarzalnych parametrów krzywej. Domniemane wyniki dodatnie
przekazuje się w czasie rzeczywistym, zaś wyniki ujemne i polecenie sprawdzenia wyników wyświetlą się po zakończeniu
testu.
Domniemane wyniki dodatnie próbek należy potwierdzić zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi
laboratorium lub stosując odpowiednią referencyjną metodę potwierdzającą
wzbogacenia z bazą bulionową pół-Frasera do wtórnych bulionów wzbogacających (jeżeli dotyczy), a następnie
wyizolowanie i potwierdzenie izolatów za pomocą stosownych metod biochemicznych i serologicznych.
W kontekście WALIDACJI NF wszystkie próbki oznaczone jako pozytywne przez Molekularny test 3M do wykrywania
2 – Listeria muszą zostać potwierdzone przez jeden z poniższych testów:
Opcja 1: Używając standardu ISO 11290-1
Opcja 2: Wdrażanie metody potwierdzającej składającej się z poniższych: Przeniesienie 0,1 ml bulionu pół-Frasera.
Przesączyć bezpośrednio do wybranego agar opisanego w ISO 11290-1
Opcja 3: Używając sond z kwasem nukleinowym, opisanych w standardzie EN ISO 7218
koloniach, z wybranego agar (Patrz: 1 lub 2).
Opcja 4: Używając innej metody certyfikowanej WALIDACJĄ NF, której zasada musi różnić się od molekularnego testu
3M do wykrywania 2 – Listeria. Musi być używany pełen protokół opisany dla tej drugiej zwalidowanej metody. Wszystkie
etapy przed rozpoczęciem potwierdzenia muszą być wspólne dla obu metod.
W przypadku niezgodnych wyników (przypuszczalnie pozytywnych z metodą alternatywną, niepotwierdzoną przez żadną
metodę opisaną powyżej), laboratorium musi przeprowadzać niezbędne kroki w celu zapewnienia ważności otrzymanego
wyniku.
20 µL
rozpoczynając od wzbogacenia pół-bulionu Frasera
(3)
10
PL
, począwszy od transferu z pierwotnego
(1, 2, 3)
.
(3)
, wykonanych w izolowanych
(5)
(Polski)