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8.2
Principes de fonctionnement
Des réactions chimiques se produisent entre les billes de réactif, le diluant contenu dans le disque de
réactif et l'échantillon ajouté. Ces réactions génèrent des chromophores mesurés par photométrie par
l'analyseur Piccolo Xpress. Le microprocesseur calcule ensuite les concentrations des substances à
analyser.
Les dispositifs optiques de mesure sont constitués d'une lampe au xénon stroboscopique, d'un sys-
tème de sélection de la longueur d'onde et d'un détecteur à longueur d'onde multiple. La lumière de la
lampe est orientée par un miroir afin de traverser chaque cuvette. Une partie de la lumière est absor-
bée par le contenu de la cuvette et le reste s'échappe par deux ouvertures et est collimaté par une len-
tille. La lumière collimatée est fractionnée par des séparateurs de faisceau et des filtres d'interférence
à des longueurs d'onde prédéterminées (340, 405, 467, 500, 515, 550, 600, 630 et 850 nm), puis cap-
turée à chaque longueur d'onde par des photodiodes.
Les réactions chimiques utilisées au cours d'une analyse sont conçues pour produire des chromo-
phores qui absorbent la lumière à des longueurs d'onde connues. Le photomètre mesure la lumière
transmise par une cuvette contenant des chromophores (cuvette de réaction). Une fois rectifiée en
termes de variabilité flash à flash et de décalage électronique, la lumière transmise est indirectement
liée à la concentration des substances à analyser de l'échantillon. Les mesures de transmittance sont
converties en absorbance à l'aide de la relation : absorbance = –log (transmittance).
Les erreurs système et les facteurs pouvant perturber les calculs des résultats de l'échantillon sont éli-
minés en mesurant l'intensité lumineuse à quatre emplacements du disque de réactif : la cuvette spéci-
fique de la méthode contenant le réactif d'analyse, l'échantillon et le diluant ; la cuvette de blanc
biologique contenant le réactif à blanc biologique, l'échantillon et le diluant (utilisé dans les réactions
à point final, voir ci-dessous) ; la cuvette ouverte, qui laisse passer la lumière ; la cuvette sombre, qui
bloque le passage de la lumière.
La lumière traversant une cuvette de réaction est mesurée à la longueur d'onde absorbée par le chro-
mophore (I
) et à celle qui n'est pas absorbée par le chromophore (I
). Le rapport de ces deux
λ
RC
λ 2RC
1
mesures permet de corriger la qualité optique des cuvettes et la variabilité flash à flash de la source de
lumière. L'intensité de la lumière transmise par la cuvette ouverte (I
, I
) est mesurée aux deux
λ 1OC
λ 2OC
mêmes longueurs d'onde que la lumière transmise par la cuvette de réaction. Une correction du déca-
lage électronique est réalisée aux deux mêmes longueurs d'onde en mesurant le signal résiduel
lorsque la cuvette sombre est située dans le chemin optique (I
, I
).
λ 1
λ 2
0
0
L'équation permettant de calculer l'absorbance est la suivante :
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Principes de fonctionnement
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