Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 89

Imunohistochemická metóda použitia protilátok Novocastra
zmrazenom svalovom tkanive.
Požadované, ale nedodávané činidlá
1. Štandardné rozpúšťadlá používané v imunohistochémii
2. 50mM tris-pufrovaný fyziologický roztok (TBS), pH 7,6
3. Zrieďovadlo protilátok – normálne sérum optimáne zriedené v TBS.
4. Normálne sérum z druhu, z ktorého pochádza sekundárna protilátka.
5. Sekundárna protilátka konjugovaná s peroxidázou – používajte podľa odporúčania výrobcu.
6. 3,3' diaminobenzidín tetrahydrochlorid (DAB) – pripravte a používajte podľa odporúčania výrobcu.
7. Upevňovacie médium – používajte podľa odporúčania výrobcu.
Požadované, ale nedodávané vybavenie
1. Inkubátor nastavený na teplotu 25
2. Všeobecné vybavenie imunohistochemického laboratória
3. Elektrický ventilátor na sušenie sklíčok vzduchom.
Antigénový záchytný roztok (pozri časť Odporúčania na použitie)
Netýka sa zmrazených rezov.
Metóda
Používatelia musia byť vyškolení v oblasti imunohistochemických techník skôr, než pristúpia k tejto metóde.
Používateľ musí stanoviť optimálne riedenie protilátok. Ak nie je uvedené inak, všetky kroky sa vykonávajú pri teplote 25
1. Rezy narežte na 4 – 10 µm a upevnite na sklíčka pokryté vhodnou vrstvou tkanivového lepidla a nechajte ich minimálne jednu
hodinu schnúť na vzduchu.
2. Rezy inkubujte s optimálne zriedenou primárnou protilátkou (pozri časť Odporúčania na použitie).
3. Premyte v TBS 2-krát po 5 minút s ľahkým kolísaním.
4. Rezy inkubujte vo vhodnej sekundárnej protilátke konjugovanej s peroxidázou.
5. Premyte v TBS 2-krát po 5 minút s ľahkým kolísaním.
6. Sklíčka inkubujte v DAB.
7. Sklíčka opláchnite v čistej vode.
8. Dehydratujte, očistite a upevnite rezy.
Úpravy predchádzajúceho vydania
.
Neuplatňuje sa
Dátum vydania
4. februára 2008 (CE protokol/zmrazený sval).
C.
o
na
TM
C.
o
G-SARC-CE
Page 88