Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 43

Immunhistokemisk fremgangsmåde til anvendelse af Novocastra
antistoffer på frossent muskelvæv.
Nødvendige reagenser, der ikke medfølger
1. Standardopløsningsmidler anvendt i immunhistokemi.
2. 50 mM Tris-bufferjusteret saltvandsopløsning (TBS) pH7,6.
3. Antistofdiluent - normalt serum optimalt fortyndet i TBS.
4. Normale sera fra de arter, i hvilke det sekundære antistof opformeres.
5. Sekundært peroxidasekonjugeret antistof - anvendes ifølge producentens anbefalinger.
6. 3,3' diaminobenzidintetrahydrochlorid (DAB) - fremstilles ifølge producentens anbefalinger.
7. Monteringsmedium - fremstilles ifølge producentens anbefalinger.
Nødvendige reagenser, der ikke medfølger
1. Inkubator indstillet til 25 C.
o
2. Almindeligt laboratorieudstyr til immunhistokemi.
3. Elektrisk ventilator til tørring af objektglas.
Antigengenfindingsopløsninger (se Anbefalinger vedrørende anvendelse)
Ikke anvendelig til frosne vævssnit.
Metodologi
Inden ibrugtagning af denne metodologi, skal brugere være oplært i immunhistokemiske teknikker.
Brugeren bør bestemme de optimale fortyndinger for antistoffer. Med mindre andet er anført, skal alle trin udføres ved 25
1. Snit og monter 4–10 µm tykke vævssnit på objektglas coatet med et passende vævsadhæsiv og lufttør i mindst en time.
2. Inkuber vævsnittene i optimalt fortyndet primært antistof (se Anbefalinger vedrørende anvendelse).
3. Vask i TBS i 2 x 5 minutter, mens de vugges forsigtigt.
4. Inkuber vævssnittene med et passende peroxidasekonjugeret sekundært antistof.
5. Vask i TBS i 2 x 5 minutter, mens de vugges forsigtigt.
6. Inkuber vævssnittene i DAB.
7. Skyl vævssnittene i rent vand.
8. Tør, klar og monter vævssnittene.
Rettelser til tidligere udgave
Ingen rettelser.
Udgivelsesdato
5. februar 2004 (CEprotocol/Frozen Muscle).
TM
C.
o
G-SARC-CE
Page 42