Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 84

Negativní reagenční kontrola
K vyhodnocení nespecifického barvení a umožnění lepší interpretace specifického barvení v místě antigenu použijte na řezu z každého
vzorku pacienta nespecifickou negativní reagenční kontrolu místo primární protilátky.
Tkáň pacienta
Nakonec vyšetřete vzorky pacienta barvené pomocí NCL-g-SARC. Intenzita pozitivního barvení musí být zhodnocena v kontextu se
vším nespecifickým barvením pozadí u negativní reagenční kontroly. Jako u každého imunohistochemického vyšetření, negativní
výsledek znamená, že antigen nebyl zjištěn, nikoli, že antigen není ve vyšetřovaných buňkách/tkáních přítomen. V případě potřeby
použijte k identifikaci falešně negativních reakcí panel protilátek.
Očekávané výsledky
Normální tkáně
Klon 35DAG/21B5 detekuje protein gama-sarkoglykan v sarkolemě vláken kosterního a srdečního svalu.
Abnormální tkáně
Klon 35DAG/21B5 byl použit při imunohistochemických vyšetřeních a u metody immunoblotting u více než 930 pacientů ke stanovení
deficience glykoproteinu spojeného s dystrofinem 35 kD, gama-sarkoglykanu.
NCL-g-SARC se doporučuje k imunohistochemickému stanovení lidského gama-sarkoglykanu.
Obecná omezení
Imunohistochemické vyšetření je vícekrokový diagnostický proces, který spočívá ve specializovaném školení ve výběru vhodných
reagencií; výběru, fixaci a zpracování tkání; přípravě imunohistochemickího sklíčka; a v interpretaci výsledků barvení.
Barvení tkáně závisí na manipulaci s tkání a jejím zpracování před barvením. Nesprávným postupem při fixaci, zmrazení, rozmrazení,
omývání, sušení, zahřívání, krájení řezů nebo kontaminací jinými tkáněmi či tekutinami mohou vzniknout artefakty, může dojít
k vychytávání protilátek nebo k falešně negativním výsledkům. Nekonzistentní výsledky mohou být důsledkem odchylek ve fixačních
metodách a metodách zalití v konzervačním médiu, nebo přirozených odchylek ve tkáni.
Nadměrné nebo nedostatečné kontrastní barvení může narušit správnou interpretaci výsledků.
Klinickou interpretaci jakéhokoliv barvení nebo jeho nepřítomnosti je nutné doplnit morfologickým vyšetřením s použitím správných
kontrol a zhodnotit je musí kvalifikovaný patolog v kontextu s klinickou anamnézou pacienta a jinými diagnostickými testy.
Protilátky společnosti Leica Biosystems Newcastle Ltd se používají, jak bylo uvedeno, u zmrazených nebo u parafínových řezů se
specifickými požadavky na fixaci. Může dojít k expresi neočekávaných antigenů, zejména u nádorů. Klinická interpretace jakéhokoli
barveného tkáňového řezu musí zahrnovat morfologickou analýzu a zhodnocení příslušných kontrol.
Literatura - všeobecná
1. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted
by blood and tissue; proposed guideline. Villanova, P.A. 1991; 7(9). Order code M29-P.
2. Battifora H. Diagnostic uses of antibodies to keratins: a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and
three polyclonal antibodies. Progress in Surgical Pathology. 6:1–15. eds. Fenoglio-Preiser C, Wolff CM, Rilke F. Field & Wood, Inc.,
Philadelphia.
3. Nadji M, Morales AR. Immunoperoxidase, part I: the techniques and pitfalls. Laboratory Medicine. 1983; 14:767.
4. Omata M, Liew CT, Ashcavai M, Peters RL. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: a
possible source of error in immunohistochemistry. American Journal of Clinical Pathology. 1980; 73:626.
5. Anderson LVB. Multiplex Western blot analysis of the muscular dystrophy proteins. Chapter 22, p369–386, in Muscular Dystrophy:
Methods and Protocols (number 43 in the Methods in Molecular Medicine series), edited by Bushby KMD & Anderson LVB. 2001.
Humana Press: Totowa, New Jersey.
6. Pogue R, Anderson LVB, Pyle A, et al. Strategy for mutation analysis in the autosomal recessive limb-girdle muscular dystrophies.
Neuromuscular Disorders. 2001; 11(1):80–87.
7. Pollitt C, Anderson LVB, Pogue R, et al. The phenotype of calpainopathy: diagnosis based on a multidisciplinary approach.
Neuromuscular Disorders. 2001; 11(3):287–296.
8. Anderson LVB, Harrison RM, Pogue R, et al. Secondary reduction in calpain 3 expression in patients with limb girdle muscular
dystrophy type 2B and Miyoshi myopathy (primary dysferlinopathies). Neuromuscular Disorders. 2000; 10(8):553–559.
9. Auranen M, Rapola J, Pihko H, et al. Muscle membrane-skeleton protein changes and histopathological characterization of muscle-
eye-brain disease. Neuromuscular Disorders. 2000; 10(1):16–23.
10. Bornemann A and Anderson LVB. Diagnostic protein expression in human muscle biopsies. Brain Pathology. 2000; 10:193–214.
11. Vainzof M, Moreira ES, Canovas M, et al. Partial alpha-sarcoglycan deficiency with retention of the dystrophin-glycoprotein complex
in a LGMD2D family. Muscle Nerve. 2000; 23(6):984–988.
12. Anderson LVB. Immunomarkers for molecular mass. Neuromuscular Disorders. 1999; 9(6-7):421–422.
13. Anderson LVB and Davison K. Multiplex Western blotting system for the analysis of muscular dystrophy proteins. American Journal of
Pathology. 1999; 154(4):1017–1022.
14. Sewry CA, Taylor J, Anderson LVB, et al. Abnormalities in alpha-, beta- and gamma-sarcoglycan in patients with limb-girdle muscular
dystrophy. Neuromuscular Disorders. 1996; 6(6):467–474.
15. Vainzof M, Passos-Bueno MR, Canovas M, et al. The sarcoglycan complex in the six autosomal recessive limb-girdle muscular
dystrophies. Human Molecular Genetics. 1996; 5(12):1963–1969.
16. Noguchi S, McNally EM Othmane KB, et al. Mutations in the dystrophin associated protein-gamma-sarcoglycan in chromosome 13
muscular dystrophy. Science 1995; 270:819–822.
Opravy předchozího vydání
Zamýšlené použití, Varování a bezpečnostní opatření, Očekávané výsledky.
Datum vydání
07 prosinec 2018
G-SARC-CE
Page 83
4