Table des Matières
Publicité
Les langues disponibles
Les langues disponibles
Metody immunohistochemiczne stosowania przeciwciał Novocastra
na zamrożonej tkance mięśniowej.
Wymagane odczynniki niedołączone do zestawu
1.
Standardowe rozpuszczalniki stosowane w immunohistochemii.
2.
50 mM roztworu soli fizjologicznej buforowanego odczynnikiem Tris (TBS) pH 7.6.
3.
Rozcieńczalnik do przeciwciał - zwykła surowica optymalnie rozcieńczona w TBS (roztworze soli fizjologicznej buforowanej odczyn-
nikiem Tris).
4.
Zwykła surowica pochodząca od gatunku, z którego otrzymywane jest przeciwciało drugorzędowe.
5.
Drugorzędowe przeciwciało skoniugowane z peroksydazą - stosować zgodnie z zaleceniami producenta.
6.
Tetrachlorowodorek 3,3'-diaminobenzydyny (DAB) - przygotować i stosować zgodnie z zaleceniami producenta.
7.
Środek do zamykania preparatów mikroskopowych - użyć zgodnie z zaleceniami producenta.
Wymagany sprzęt niedołączony do zestawu
1.
Inkubator ustawiony na 25
2.
Ogólne wyposażenie laboratorium immunohistochemicznego.
3.
Stosować wentylator elektryczny do suszenia skrawków na powietrzu.
Roztwory do odmaskowywania antygenu (zob. Zalecenia dotyczące stosowania)
Nie stosować na zamrożonych skrawkach.
Metodologia
Przed przystąpieniem do działań w ramach niniejszej metodologii użytkownik powinien zostać przeszkolony w zakresie technik
immunohistochemicznych.
Użytkownicy powinni określić optymalne rozcieńczenia dla przeciwciał. O ile nie wskazano inaczej, wszystkie etapy należy
przeprowadzać w temperaturze (25
1.
Uciąć i przymocować skrawki o rozmiarach 4-10 μm na preparatach pokrytych odpowiednim klejem tkankowym i suszyć je na
powietrzu przez co najmniej godzinę.
2.
Inkubować skrawki w optymalnie rozcieńczonym przeciwciele pierwszorzędowym (zob. Zalecenia dotyczące stosowania).
3.
Przemywać w buforzeTBS przez 2 x 5 minut, delikatnie potrząsając.
4.
Inkubować skrawki w odpowiednim drugorzędowym przeciwciele skoniugowanym z peroksydazą.
5.
Przemywać w buforzeTBS przez 2 x 5 minut, delikatnie potrząsając.
6.
Inkubować skrawki w DAB (3,3'-diaminobenzydynie).
7.
Opłukać skrawki w czystej wodzie.
8.
Skrawki odwodnić, oczyścić i zamknąć.
Zmiany wprowadzone do poprzedniego wydania
Nie dotyczy.
Data publikacji
4 lutego 2008 r. (CEprotocol/Frozen Muscle).
C.
o
C).
o
TM
G-SARC-CE
Page 76
Publicité
Table des Matières
