Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 47

Aanpassingen ten opzichte van Vorige Editie
Niet toepasbaar.
Publicatiedatum
07 december 2018
Immunohistochemische methodologie voor het gebruik van Novocastra
TM
antilichamen bij ingevroren spierweefsel.
Benodigde, maar niet inbegrepen reagentia
1. Standaard oplossingen gebruikt in de immunohistochemie.
2. 50 mM Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS), pH 7,6.
3. Antilichaamverdunningsmiddel - normaal serum optimaal verdund in TBS.
4. Normaal serum van de soort waarbij het secundaire antilichaam wordt nopgewekt.
5. Secundair peroxidase-geconjugeerd antilichaam - gebruiken volgens de aanbevelingen van de fabrikant.
6. 3,3' diaminobenzidinetetrahydrochloride (DAB) - bereiden en gebruiken volgens de aanbevelingen van de fabrikant.
7 Inbedmiddel - gebruiken volgens de aanbevelingen van de fabrikant
Benodigde, maar niet inbegrepen apparatuur
1. Incubator ingesteld op 25 °C.
2. Algemene uitrusting van immunohistochemisch laboratorium.
3. Elektrische ventilator voor het met aan lucht drogen van objectglaasjes.
Antigeenhersteloplossingen (zie Aanbevelingen voor het gebruik)
Niet van toepassing op ingevroren coupes.
Methodologie
Gebruikers moeten vóór het ondernemen van deze methodologie worden opgeleid in immunohistochemische technieken.
Gebruikers moeten de optimale verdunning voor antilichamen bepalen. Tenzij anders vermeld worden alle stappen uitgevoerd bij 25 °C.
1. Snij coupes van 4-10 µm, breng ze aan op objectglaasjes waarop een geschikt weefselhechtmiddel is aangebracht en droog
ze ten minste een uur lang aan de lucht.
2. Incubeer de coupes met optimaal verdund primair antilichaam (zie Aanbevelingen voor het gebruik).
3. Was gedurende 2 x 5 minuten in TBS-buffer onder zachtjes wiebelen.
4. Incubeer de coupes in het juiste peroxidase-geconjugeerde secundaire antilichaam.
5. Was gedurende 2 x 5 minuten in TBS-buffer onder zachtjes wiebelen.
6. Incubeer de objectglaasjes in DAB.
7. Spoel de objectglaasjes af met schoon water.
8. Dehydrateer en klaar de coupes en breng ze aan op de objectglaasjes.
Aanpassingen ten opzichte van de vorige uitgave
Niet van toepassing.
Datum uitgave
4 februari 2008 (CE-protocol/ingevroren spierweefsel).
G-SARC-CE
Page 46