Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 85

Imunohistochemická metodika při použití protilátek Novocastra
zmrazené svalové tkáni.
Potřebné reagencie, které nejsou součástí dodávky
1. Standardní rozpouštědla používaná v imunohistochemii.
2. Fyziologický roztok pufrovaný 50mM roztokem tris-pufru (TBS), pH 7,6.
3. Ředicí roztok na protilátky – normální sérum optimálně naředěné v TBS.
4. Normální sérum druhu, ze kterého byla získána sekundární protilátka.
5. Sekundární protilátka konjugovaná s peroxidázou – použijte podle doporučení výrobce.
6. 3,3' diaminobenzidin tetrahydrochlorid (DAB) - připravte a použijte podle doporučení výrobce.
7. Fixační médium – použijte podle doporučení výrobce.
Potřebné vybavení, které není dodáno
1. Inkubátor nastavený na 25
2. Obecné vybavení imunohistochemické laboratoře.
3. Elektrický ventilátor k sušení sklíček vzduchem.
Odmaskovací roztoky pro antigen (viz Doporučení k použití)
Nevztahuje se na zmrazené řezy.
Metodika
Než uživatelé přistoupí k této metodice, musí být proškoleni v imunohistochemických technikách.
Uživatelé musí stanovit optimální ředění pro protilátky. Pokud není uvedeno jinak, provádějí se všechny kroky při 25
1. Nakrájejte řezy o tloušťce 4–10 µm, namontujte je na sklíčka potažená vhodným tkáňovým lepidlem a sušte na vzduchu po dobu
nejméně jedné hodiny.
2. Řezy inkubujte v optimálně naředěné primární protilátce (viz Doporučení k použití).
3. Omývejte v pufru TBS po dobu 2 x 5 minut s lehkým kýváním.
4. Řezy inkubujte v příslušné sekundární protilátce konjugované s peroxidázou.
5. Omývejte v pufru TBS po dobu 2 x 5 minut s lehkým kýváním.
6. Sklíčka inkubujte v DAB.
7. Sklíčka opláchněte v čisté vodě.
8. Řezy odvodněte, projasněte a namontujte.
Opravy předchozího vydání
Nevztahuje se.
Datum vydání
4. února 2008 (CE protokol/zmrazený sval).
C.
o
na
TM
C.
o
G-SARC-CE
Page 84