Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 51

Immunhistokjemisk metode for bruk av Novocastra -antistoffer på frosset
TM
muskelvev.
Nødvendige reagenser som ikke følger med
1. Standard løsemidler som brukes innen immunhistokjemi.
2. 50 mM tris-bufret saltvann (TBS) pH 7,6.
3. Antistoffortynner – normalt serum optimalt fortynnet i TBS.
4. Normalt serum fra artene hvor det sekundære antistoffet er hevet.
5. Sekundært peroksidase-konjugert antistoff – bruk som anbefalt av produsenten.
6. 3,3'-diaminbenzidin-tetrahydroklorid (DAB) – klargjør og bruk som anbefalt av produsenten.
7. Monteringsmedium – bruk som anbefalt av produsenten.
Nødvendig utstyr som ikke følger med
1. Inkubator stilt til 25 °C.
2. Generelt immunhistokjemisk laboratorieutstyr.
3. Elektrisk vifte for lufttørking av objektglass.
Antigen-demaskeringsløsninger (se Anbefalinger for bruk)
Gjelder ikke for frosne snitt.
Metode
Før bruk av denne metoden må brukerne være opplært i immunhistokjemiske teknikker
Brukerne skal fastslå optimale fortynninger for antistoffer. Med mindre annet er angitt, utføres alle trinn ved 25 °C.
1. Kutt og monter 4–10 µm snitt på objektglass belagt med et egnet vevlim, og lufttørk i minst én time.
2. Inkuber snittene med optimalt fortynnet primært antistoff (se Anbefalinger for bruk).
3. Vask i TBS-buffer i 2 x 5 minutter med forsiktig vugging.
4. Inkuber snittene i egnet peroksidase-konjugert sekundært antistoff.
5. Vask i TBS-buffer i 2 x 5 minutter med forsiktig vugging.
6. Inkuber objektglassene i DAB.
7. Skyll objektglassene i rent vann.
8. Dehydrer, klarer og monter snitt.
Endringer på tidligere utgave
Ikke relevant.
Utstedelsesdato
4. februar 2008 (CE-protokoll / frosset muskelvev).
G-SARC-CE
Page 50