Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 73

Иммуногистохимические методы использования антител
Novocastra на замороженных мышечных тканях.
TM
Необходимые реактивы, не входящие в комплект поставки
1. Стандартные растворители, использующиеся в иммуногистохимических исследованиях.
2. 50 мМ трис-буферный солевой раствор (Tris-buffered saline (TBS)), pH 7,6.
3. Разбавитель антител — нормальная сыворотка, оптимально разведенной в TBS.
4. Нормальная сыворотка, полученная от видов, использующихся для формирования вторичных антител.
5. Вторичные пероксидаз-конъюгированные антитела: использовать в соответствии с рекомендациями производителя.
6. 3,3'-Диаминобензидина тетрагидрохлорид (DAB): приготовить и использовать в соответствии с рекомендациями производи-
теля.
7. Среда для заливки препаратов: используйте в соответствии с рекомендациями производителя.
Необходимое оборудование, не входящее в комплект поставки
1. Инкубатор, установленный на 25 °C.
2. Стандартное лабораторное оборудование для иммуногистохимических исследований.
3. Электрический вентилятор для воздушной просушки предметных стекол.
Растворы для демаскировки антигенов: см. рекомендации по использованию
Не применимо к замороженным срезам.
Методика
Прежде чем применять эту методику, пользователи должны научиться проводить иммуногистохимические исследования.
Пользователи должны определить оптимальные разведения препаратов антител. Если не указано иное, выполняйте все этапы
при температуре 25 C.
°
1. Срежьте и поместите срезы размером 4–10 мкм на предметные стекла, покрытые подходящей тканью, и выполняйте воз-
душную просушку в течение как минимум одного часа.
2. Инкубируйте срезы с использованием оптимально разведенных первичных антител (смотрите Рекомендации по использова-
нию).
3. 2 раза по 5 минут промывайте препараты в буферном растворе TBS, осторожно покачивая.
4. Инкубируйте срезы с использованием соответствующих вторичных пероксидаз-конъюгированных антител.
5. 2 раза по 5 минут промывайте препараты в буферном растворе TBS, осторожно покачивая.
6. Инкубируйте предметные стекла с использованием DAB.
7. Промойте предметное стекло чистой водой.
8. Дегидратируйте, очистите и закрепите срезы.
Дополнения к предыдущему выпуску
Не применимо.
Дата выпуска
4 февраля 2008 г. (CEprotocol/Замороженная мышца).
G-SARC-CE
Page 72