Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 64

A Novocastra
TM
felhasználásának immunhisztokémiai módszere.
Szükséges, de nem biztosított reagensek
1. Az immunhisztokémiában alkalmazott standard oldószerek.
2. 50 mM tris-pufferelt sóoldat (Tris-buffered saline, TBS), pH 7,6.
3. Antitesthígító – TBS-ben optimálisan hígított normál szérum.
4. Azokból a fajokból származó normál szérum, amelyekben a másodlagos antitest termelődött.
5. Másodlagos, peroxidázzal konjugált antitest – használata a gyártó javaslatának megfelelően történik.
6. 3,3' diaminobenzidin-tetrahidroklorid (DAB) – a gyártó javaslatának megfelelően készítendő el és használandó fel.
7. Fedőanyag – a gyártó javaslatának megfelelően használandó.
Szükséges, de nem biztosított felszerelés
1. 25 C-ra beállított inkubátor.
o
2. Általános immunhisztokémiai laboratóriumi felszerelés.
3. Elektromos ventilátor a tárgylemezek levegőn történő szárításához.
Antigénfeltáró oldatok (lásd itt: Javaslatok a felhasználással kapcsolatban)
Fagyasztott metszeteknél nem alkalmazható.
Módszer
A módszer végrehajtása előtt a felhasználóknak képzésben kell részesülniük az immunhisztokémiai módszerekkel kapcsolatban.
A felhasználóknak kell meghatározniuk az optimális antitesthígításokat. Hacsak nincs másként feltüntetve, minden lépést 25
végrehajtani.
1. Készítse el és tegye fel alkalmas szövegragasztóval bevont tárgylemezekre, majd szárítsa levegőn legalább egy órán át a 4–10 µm-
es metszeteket.
2. Optimálisan hígított elsődleges antitesttel inkubálja a metszeteket (lásd Felhasználási javaslatok).
3. Finoman rázogatva mossa őket 2 x 5 percig TBS pufferben.
4. Peroxidázzal megfelelően konjugált másodlagos antitestben inkubálja a metszeteket.
5. Finoman rázogatva mossa őket 2 x 5 percig TBS pufferben.
6. Inkubálja a tárgylemezeket DAB-ben.
7. Öblítse le a tárgylemezeket tiszta vízben.
8. Víztelenítse és tisztítsa meg a metszeteket, majd helyezze őket tárgylemezre.
Módosítások az előző változathoz képest
Nem alkalmazható.
Kiadás dátuma
2008. február 4. (CE-protokoll/fagyasztott izomszövet).
G-SARC-CE
Page 63
antitestek fagyasztott izomszöveten történő
C-on kell
o