Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 81

Imunohistokemijska metodologija za uporabo protiteles Novocastra
na zamrznjenem mišičnem tkivu.
Potrebni reagenti, ki niso priloženi
1. Standardna topila, ki se uporabljajo v imunohistokemiji.
2. Fiziološka raztopina s 50 mM pufra tris (TBS), pH 7,6.
3. Redčilo za protitelesa – normalni serum, optimalno razredčen v TBS.
4. Normalni serum vrste, pri kateri je pridobljeno sekundarno protitelo.
5. Sekundarno s peroksidazo konjugirano protitelo – uporabite skladno s priporočili izdelovalca.
6. 3,3' diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB) – pripravite in uporabite skladno s priporočili izdelovalca.
7. Medij za pritrjevanje – uporabljajte skladno s priporočili izdelovalca.
Potrebna oprema, ki ni priložena
1. Inkubator, nastavljen na 25
2. Splošna oprema za imunohistokemijski laboratorij.
3. Električni ventilator za sušenje preparata z zrakom.
Raztopine za pridobivanje antigenov (glejte priporočila za uporabo)
Ne velja za zamrznjene rezine.
Metodologija
Preden uporabniki začnejo uporabljati to metodologijo, morajo biti usposobljeni za delo z imunohistokemijskimi tehnikami.
Uporabniki morajo sami določiti optimalne razredčitve protiteles. Vse korake izvajajte pri temperaturi 25
drugače.
1. Odrežite in namestite rezine debeline 4–10 µm na objektna stekelca, prevlečena z ustreznim lepilom za tkivo, in sušite na zraku
najmanj eno uro.
2. Inkubirajte rezine z optimalno razredčenim primarnim protitelesom (glejte priporočila za uporabo).
3. Izpirajte v pufru TBS 2 x 5 minut in pri tem nežno stresajte.
4. Rezine inkubirajte v ustreznih s peroksidazo konjugiranih sekundarnih protitelesih.
5. Izpirajte v pufru TBS 2 x 5 minut in pri tem nežno stresajte.
6. Inkubirajte preparate v DAB.
7. Objektna stekelca sperite s čisto vodo.
8. Dehidrirajte, očistite in pritrdite rezine.
Dodatki in spremembe k prejšnji izdaji
Navedba smiselno ni potrebna.
Datum izdaje
4. februar 2008 (protokol CE/zamrznjena mišica).
C.
o
TM
C, razen če je navedeno
o
G-SARC-CE
Page 80