Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 71

Кроме того, разнообразные типы клеток для отрицательного контроля можно часто найти в большинстве срезов тканей, однако
такие препараты должны быть проверены пользователем.
Неспецифическое окрашивание, если оно присутствует, обычно выглядит диффузным. В срезах тканей, избыточно
фиксированных формалином, можно также иногда увидеть окрашивание соединительной ткани. Для интерпретации
результатов окрашивания используйте интактные клетки. Некротизированные или разрушенные клетки часто окрашиваются
неспецифически. Неиммунное связывание белков или продуктов реакции с субстратом может привести к ложноположительным
3
результатам. Такие же результаты могут быть связаны с эндогенными ферментами, например псевдопероксидазой (в
эритроцитах), эндогенной пероксидазой (цитохром C) или эндогенным биотином (например, в печени, молочной железе,
головном мозге или почке) в зависимости от типа использованного иммунного окрашивания. Чтобы отличить активность
эндогенных ферментов или неспецифическое связывание ферментов от специфической иммунореактивности, можно
выполнить окрашивание дополнительных тканей пациента исключительно хромогенным субстратом или ферментными
комплексами (авидин-биотин, стрептавидин, меченый полимер) и хромогенным субстратом соответственно. При наличии
специфического окрашивания в отрицательном контроле ткани результаты исследования полученных у пациентов образцов
считаются недействительными.
Отрицательный контроль реактива
Для оценки неспецифического окрашивания и лучшей интерпретации специфического окрашивания в области связывания
антигена, исследуя срезы каждого образца, взятого у пациента, вместо первичных антител используйте реактив, служащий в
качестве неспецифического отрицательного контроля.
Ткань, полученная у пациента
Исследуйте полученные у пациентов образцы, окрашенные NCL-g-SARC, в последнюю очередь. Интенсивность положительного
результата окрашивания следует оценивать с учетом любого неспецифического фонового окрашивания реактива,
представляющего собой отрицательный контроль. Как и при любом иммуногистохимическом исследовании, отрицательный
результат означает необнаружение антигена, но не его отсутствие в исследованных клетках или ткани. При необходимости
следует использовать панель антител для выявления ложноотрицательных реакций.
Ожидаемые результаты
Нормальные ткани
Клон 35DAG/21B5 обнаружил белок гамма-саркогликан в сарколемме скелетных и сердечных мышечных волокнон.
Патологически измененные ткани
Клон 35DAG/21B5 использовался в иммуногистохимических и иммуноблотинговых исследованиях при участии свыше 930
пациентов, чтобы определить недостаточность 35 кД дистрофин-ассоциированного гликопротеина, гамма-сакогликана.
NCL-g-SARC рекомендуется для идентификации гамма-саркогликана человека методом иммуногистохимического
анализа.
Общие ограничения
Иммуногистохимическое исследование является многостадийным диагностическим процессом, требующим специальных
навыков в выборе надлежащих реактивов; выборе, фиксации и обработке тканей; приготовлении среза с ИГХ препаратом;
интерпретации результатов окрашивания.
Окрашивание тканей зависит от обращения с тканями и их обработкой перед окрашиванием. Неправильные процедуры
фиксации, замораживания, оттаивания, промывки, сушки, нагрева, приготовления срезов, а также загрязнение другими тканями
или жидкостями могут приводить к артефактам, захвату антител или ложноотрицательным результатам. Противоречивые
результаты могут быть обусловлены различиями методов фиксации и заливки препарата или присущей тканям внутренней
неравномерностью структуры.
Чрезмерное или неполное контрастирование может негативно отразиться на точности интерпретации результатов.
Клиническая интерпретация любого окрашивания или его отсутствия должна быть дополнена морфологическими
исследованиями с надлежащими контролями и должна быть оценена квалифицированным патологом с учетом анамнеза
пациента и других диагностических тестов.
Изготовленные компанией Leica Biosystems Newcastle Ltd антитела предназначены, как указано выше, для применения
на замороженных или залитых в парафин срезах и требуют выполнения конкретных требований по фиксации. Возможна
непредвиденная экспрессия антигена, особенно в опухолях. Клиническая интерпретация любого окрашенного среза ткани
должна включать морфологический анализ и оценку соответствующих контролей.
Литература — общая
1. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted
by blood and tissue; proposed guideline. Villanova, P.A. 1991; 7(9). Order code M29-P.
2. Battifora H. Diagnostic uses of antibodies to keratins: a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and
three polyclonal antibodies. Progress in Surgical Pathology. 6:1–15. eds. Fenoglio-Preiser C, Wolff CM, Rilke F. Field & Wood, Inc.,
Philadelphia.
3. Nadji M, Morales AR. Immunoperoxidase, part I: the techniques and pitfalls. Laboratory Medicine. 1983; 14:767.
4. Omata M, Liew CT, Ashcavai M, Peters RL. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: a
possible source of error in immunohistochemistry. American Journal of Clinical Pathology. 1980; 73:626.
5. Anderson LVB. Multiplex Western blot analysis of the muscular dystrophy proteins. Chapter 22, p369–386, in Muscular Dystrophy:
Methods and Protocols (number 43 in the Methods in Molecular Medicine series), edited by Bushby KMD & Anderson LVB. 2001.
Humana Press: Totowa, New Jersey.
6. Pogue R, Anderson LVB, Pyle A, et al. Strategy for mutation analysis in the autosomal recessive limb-girdle muscular dystrophies.
Neuromuscular Disorders. 2001; 11(1):80–87.
7. Pollitt C, Anderson LVB, Pogue R, et al. The phenotype of calpainopathy: diagnosis based on a multidisciplinary approach.
Neuromuscular Disorders. 2001; 11(3):287–296.
4
G-SARC-CE
Page 70