Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 55

Donmuş kas dokusunda Novocastra antikorları kullanmak için
TM
immünohistokimya yöntemi.
Gereken ama sağlanmayan reaktifler
1.
İmmünohistokimyada kullanılan standart çözücüler.
2. 50 mM Tris tamponlu salin (TBS) pH 7,6.
3. Antikor seyreltici - TBS'de optimal olarak seyreltilmiş normal serum.
4. Sekonder antikorun yetiştirilmiş olduğu türlerden normal serum.
5. Sekonder peroksidaz konjuge antikor - üreticinin önerdiği şekilde kullanın.
6. 3,3' Diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB) - üreticinin önerdiği şekilde hazırlayın ve kullanın.
7. Monte etme solüsyonu - üreticinin önerdiği şekilde kullanın.
Gereken ama sağlanmayan ekipman
1. 25 °C'ye ayarlı inkübatör.
2. Genel immünohistokimya laboratuvar ekipmanı.
3. Slaytları havayla kurutmak için elektrikli fan.
Antijen geri kazanma solüsyonları (bkz. Kullanım Önerileri)
Donmuş kesitler için geçerli değildir.
Yöntem
Bu yönteme başlamadan önce kullanıcılar immünohistokimya teknikleri konusunda eğitimli olmalıdır.
Antikorlar için optimal dilüsyonları kullanıcıların kendileri belirlemelidir. Aksi belirtilmedikçe tüm adımlar 25 °C'de yapılır.
1
. 4–10 µm kesitler halinde kesin ve uygun doku yapışkanıyla kaplı lamlara monte edin ve en az bir saat boyunca havayla kurutun.
2. Kesitleri, optimum şekilde seyreltilmiş primer antikorla inkübe edin (bkz. Kullanım Önerileri).
3. TBS tamponda hafif sallamayla 2 x 5 dakika yıkayın.
4. Kesitleri, uygun peroksidaz konjuge sekonder antikorda inkübe edin.
5. TBS tamponda hafif sallamayla 2 x 5 dakika yıkayın.
6. Slaytları DAB'da inkübe edin.
7. Slaytları temiz suda durulayın.
8. Kesitleri dehidrate edin, saydamlaştırın ve monte edin.
Önceki Sayıdan Değişiklikler
Geçerli değildir.
Yayın Tarihi
4 Şubat 2008 (CE protokolü/Donmuş Kas).
G-SARC-CE
Page 54