Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 60

Имунохистохимична методология за използване на антитела
Novocastra на замразена мускулна тъкан.
TM
Необходими, но непредоставени реагенти
1. Стандартни разтворители, използвани с имунохистохимията.
2. 50 mM трометамин-буфериран физиологичен разтвор (TBS) pH 7,6.
3. Разредител за антитела – нормален серум, оптимално разреден в TBS (трометамин-буфериран физиологичен разтвор).
4. Нормален серум от видовете, от които се генерира вторично антитяло.
5. Вторично конюгирано в пероксидаза антитяло – използвайте според препоръките на производителя.
6. 3,3' диаминобензидин тетрахидрохлорид (DAB) – подгответе и използвайте според препоръките на производителя.
7. Микроскопски препарат – използвайте според препоръките на производителя.
Необходимо, но непредоставено оборудване
1. Инкубатор, настроен на температура 25
2. Общо имунихистохимично лабораторно оборудване.
3. Електрически вентилатор за въздушно изсушаване на предметни стъкла.
Разтвори за извличане на антиген (вж. Препоръки за употреба)
Не се прилага към замразени срези.
Методология
Преди прилагането на тази методология потребителите трябва да бъдат обучени за имунохистохимичните техники.
Потребителите трябва да определят оптималните разтвори за антитела. Освен ако не е указано друго, всички стъпки се
извършват при температура от 25
1. Отрежете и поставете 4 – 10 µm срези върху предметни стъкла, покрити с подходящ тъканен адхезив и сушете с въздух
най-малко един час.
2. Инкубирайте срезите с оптимално разредено първично антитяло (вж. Препоръки за употреба).
3. Промийте в трометамин-буфериран физиологичен разтвор (TBS) буфер за 2 x 5 минути, разклащайки внимателно.
4. Инкубирайте срезите в подходящо конюгирано с пероксидаза вторично антитяло.
5. Промийте в трометамин-буфериран физиологичен разтвор (TBS) буфер за 2 x 5 минути, разклащайки внимателно.
6. Инкубирайте предметните стъкла в DAB.
7. Изплакнете предметните стъкла с чиста вода.
8. Дехидрирайте, изчистете и поставете срезите върху предметното стъкло.
Изменения на предишно издание
Не е приложимо.
Дата на издаване
4 февруари 2008 г. (CEprotocol/Frozen Muscle).
G-SARC-CE
Page 59
C.
o
C.
o