Leica BIOSYSTEMS NCL-g-SARC Mode D'emploi page 35

Immunhistokemisk metodologi för användning av Novocastra
antikroppar på fryst muskelvävnad.
Reagens som krävs men ej tillhandahålls
1. Standardlösningar som används inom immunhistokemi.
2. 50 mM Trisbuffrad saltlösning (TBS) pH 7,6.
3. Antikroppsutspädningsmedel – normalt serum optimalt spätt i TBS .
4. Normala sera från de arter i vilka den sekundära antikroppen odlas.
5. Sekundär peroxidaskonjugerad antikropp – använd enligt tillverkarens rekommendationer.
6. 3,3' Diaminobenzidin tetrahydroklorid (DAB) – bered och använd enligt tillverkarens rekommendationer.
7. Monteringsmedel – bered enligt tillverkarens rekommendationer.
Utrustning som krävs men ej tillhandahålls
1 .Inkubator inställd på 25
o
2. Allmän immunhistokemisk laboratorieutrustning.
3. Elektrisk fläkt för lufttorkning av objektglas.
Antigenåtervinningslösningar (se Rekommendationer vid användning)
Gäller ej frysta snitt.
Metodologi
Innan denna metodologi tillämpas måste användare utbildas i immunhistokemiska tekniker. Användare bör fastställa optimal spädning
för antikroppar. Alla steg utförs om inget annat anges vid rumstemperatur på 25
1. Skär och montera 4–10 μm snitt på objektglas täckta med ett lämpligt vävnadsklister och lufttorka i minst en timme.
2. Inkubera snitten med optimalt spädd primär antikropp (se Rekommendationer vid användning).
3. Tvätta snitten i TBS-buffert i 2 x 5 minuter och gunga försiktigt.
4. Inkubera snitten i lämplig peroxidaskonjugerad sekundär antikropp.
5. Tvätta snitten i TBS-buffert i 2 x 5 minuter och gunga försiktigt.
6. Inkubera objektglasen i DAB.
7. Skölj objektglasen i rent vatten.
8. Dehydratisera, klargör och montera snitten.
Rättelser av tidigare utgivning
Gäller ej.
Utgivningsdatum
5 februari 2004 (CEprotocol/Frozen Muscle).
C.
C .
o
TM
G-SARC-CE
Page 34