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Remarque : il est recommandé d'entretenir et de calibrer toutes les pipettes utilisées dans le flux de travail de QIAcuityDx.
Pour une meilleure manipulation de la plaque, vous pouvez placer la plaque dans le plateau de nanoplaque qui peut être
commandé en tant qu'accessoire, voir Annexe B – Accessoires QIAcuityDx ou la page Web QIAcuityDx sur
www.qiagen.com
Pour des conseils détaillés sur l'ensemble du Master Mix et l'optimisation des dosages, consultez la fiche produit du kit
QIAcuityDx Universal MasterMix, disponible sur le site Web de QIAGEN (www.qiagen.com).
Pour configurer une plaque, procéder comme suit :
1. Préparer le master mix en fonction de la configuration de la réaction. Pour préparer le mélange réactionnel sans
échantillon, le kit QIAcuityDx Universal MasterMix doit être mélangé avec du chlorure de magnésium, des amorces, de
l'eau sans RNase et éventuellement des enzymes de restriction et des sondes conformément au manuel du kit. Le
volume final dépend de la nanoplaque QIAcuityDx utilisée.
Remarque : pour éviter les mélanges réactionnels non homogènes, il est nécessaire d'utiliser une préplaque PCR
standard ou des microtubes. Les volumes de réactifs calculés doivent être pipettés dans les plaques/microtubes PCR,
puis l'échantillon doit être ajouté en conséquence. Pour un mélange homogène du mélange réactionnel, les
plaques/microtubes doivent être scellés/fermés, brièvement vortexés et brièvement centrifugés.
Remarque : la fragmentation enzymatique de l'ADN de plus de 20 kb assure une distribution uniforme de la matrice
dans la nanoplaque QIAcuityDx, ce qui permet une quantification précise et exacte. Par conséquent, l'ajout d'une
enzyme de restriction dépend de la taille de la matrice utilisée. En cas de fragmentation enzymatique à l'aide des
enzymes de restriction recommandées, la plaque doit être incubée à température ambiante pendant 10 minutes.
Consulter le Guide d'application sur
Important : ne pas pipeter le Master Mix et l'échantillon séparément dans la nanoplaque, car cela conduirait à un
mélange insuffisant.
2. Pipeter chaque mélange réactionnel de la plaque dans un puits de la nanoplaque. Si possible, utiliser une pipette
électrique à 1 canal. Pour assurer un pipetage sans bulles, nous recommandons de pipeter 40 µL pour la Nanoplate
26k 8/24 puits et 12 µL pour la nanoplaque 8,5 k 96/24 puits de votre mélange réactionnel préparé au fond du puits
d'entrée respectif du nanoplaque. Veiller à ne pas pipeter dans le puits de sortie au lieu du puits d'entrée.
Remarque : pour éviter d'endommager la surface optique et pour réduire la poussière qui interférerait avec l'imagerie
et l'analyse des résultats, nous recommandons de placer la nanoplaque dans un plateau de nanoplaques avant de
pipeter le mélange réactionnel dans la nanoplaque.
Remarque : ne pas centrifuger la nanoplaque car cela entraînerait un préamorçage et un remplissage insuffisant des puits.
Remarque : ne pas agiter la nanoplaque car cela entraînerait un remplissage insuffisant des puits.
Remarque : pour éviter l'introduction de bulles d'air dans le puits d'échantillonnage, ne pipeter que jusqu'au premier arrêt.
3. Appliquer le dispositif d'étanchéité de plaque fourni avec les nanoplaques comme suit pour assurer un bon
remplissage des puits et éviter l'évaporation et la contamination :
Le joint de plaque rigide se compose d'un joint de plaque et de 2 feuilles de protection. La feuille à 3 couches ne doit
pas être pliée. Retirer soigneusement la feuille de protection blanche inférieure, centrer et aligner le joint de la plaque
(contenant encore la feuille de protection supérieure) avec le bord inférieur du cadre coloré de la rangée H. La feuille
ne doit pas se chevaucher de plus de 1 mm d'un côté ou de l'autre ; dans le cas contraire, la nanoplaque ne pourra
pas être traitée par l'instrument. Si le joint de la plaque est mal placé ou si le joint ne couvre pas certaines parties de
la nanoplaque, le retirer soigneusement et répéter l'étape de scellement avec un nouveau joint. Une étanchéité correcte
de la nanoplaque évite que les échantillons ne soient pas entièrement traités.
Manuel d'utilisation du système QIAcuityDx | 07/2024
www.qiagen.com
pour les enzymes de restriction recommandées.
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