Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 7

• Pour obtenir une copie de la fiche technique des substances dangereuses, contactez votre distributeur local ou le bureau régional de
Leica Biosystems, ou allez sur le site Web de Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com.
• Les échantillons, avant et après fixation, et tous les matériels ayant été en contact avec eux, devraient être manipulés comme s'ils
étaient à risque infectieux et éliminés avec les précautions adéquates
de la peau et des muqueuses avec les réactifs ou les échantillons. Si des réactifs ou des échantillons entrent en contact avec des
zones sensibles, rincer abondamment à l'eau. Consultez un médecin.
• Renseignez-vous sur les règlements fédéraux, nationaux et locaux pour l'élimination des composés potentiellement toxiques.
• Éviter une contamination microbienne des échantillons qui peut entraîner un marquage non spécifique.
• Des durées ou températures de révélation ou d'incubation autres que celles spécifiées peuvent donner des résultats erronés. Tout
changement doit être validé par l'utilisateur.
Mode D'emploi
Lambda Probe a été développé pour être utilisé sur le système BOND automatisé (qui comprend les systèmes Leica BOND-MAX et
Leica BOND-III) en association avec Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection et les réactifs auxiliaires BOND. Le
protocole de coloration recommandé pour Lambda Probe est ISH Protocol A. Un prétraitement enzymatique est recommandé avec
BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, pendant 15 minutes.
Des contrôles appropriés de tissu et de réactif doivent toujours être employés. Le protocole relatif aux contrôles de tissu et de réactif doit
correspondre à celui du Lambda Probe.
Contrôle de qualité
Des différences de traitement des tissus et de procédures techniques dans le laboratoire de l'utilisateur sont susceptibles de conduire
à une variabilité significative des résultats, ce qui rend nécessaire la mise en œuvre régulière de contrôles en interne, en plus des
procédures suivantes.
Contrôle positif du tissu
Il est utilisé pour indiquer que les tissus ont été préparés correctement et que les techniques de marquage sont appropriées. Un contrôle
positif du tissu doit être inclus pour chaque série de conditions d'essais et pour chaque essai de marquage. Un tissu présentant un
marquage faiblement positif est plus adapté à un contrôle optimal de qualité qu'un tissu présentant un marquage fortement positif, il
permet également de détecter des niveaux moindres de dégradation du réactif.
Contrôle négatif du tissu
Il doit être examiné après le contrôle positif du tissu afin de vérifier la spécificité du marquage de la sonde vers le site cible.
La diversité des différents types cellulaires présents dans la plupart des coupes tissulaires permet fréquemment de disposer de sites de
contrôle négatif, mais cette possibilité doit être vérifiée par l'utilisateur.
Contrôle négatif du réactif
Utiliser RNA Negative Control Probe PB0809 à la place de Lambda Probe avec une coupe de chaque échantillon du patient afin
d'évaluer le marquage non spécifique et de permettre une meilleure interprétation du marquage spécifique au niveau du site cible.
Contrôle positif du réactif
Utiliser RNA Positive Control Probe PB0785 à la place de Lambda Probe avec une coupe de chaque échantillon du patient afin d'obtenir
des informations sur la préservation des acides nucléiques dans le tissu ainsi que la pénétrabilité des acides nucléiques vis-à-vis
de la sonde. Si RNA Positive Control Probe ne présente pas de marquage positif, les résultats des échantillons d'essai doivent être
considérés comme invalides.
Tissu du patient
Examiner les échantillons du patient marqués avec Lambda Probe en dernier. L'intensité du marquage positif ne doit être évaluée que
par rapport au marquage non spécifique obtenu avec RNA Negative Control Probe PB0809.
Résultats Attendus
Tissus sains
PB0669 a détecté de l'ARNm lambda dans les cellules B dans la rate et les amygdales, ainsi que quelques cellules B dans un grand
éventail de tissus, y compris la poitrine, le col de l'utérus, le foie, la glande salivaire, la glande parotide, les glandes surrénales, le larynx,
l'intestin grêle et le gros intestin. Des cellules B à précurseurs étaient également positives pour l'ARNm lambda dans la moelle osseuse.
Une coloration supplémentaire a été détectée dans les cellules épithéliales de la thyroïde, de la prostate, du larynx, et de l'œsophage,
des tubules du rein, des cellules sécrétrices dans les glandes surrénales et les cellules de Leydig. (Nombre total de cas normaux
évalués = 109).
Tissus tumoraux
PB0669 a coloré 4/6 myélomes de cellules plasmatiques. Aucune coloration n'a été observée dans les lymphomes à cellules T (0/3),
lymphomes diffus à grandes cellules B (0/2), lymphomes d'Hodgkin (0/2), lymphome de Burkitt (0/1), tumeurs pulmonaires (0/3), tumeurs
ovariennes (0/2), tumeurs du foie (0/3), tumeurs de la thyroïde (0/2), tumeurs de l'œsophage (0/2), tumeurs de la poitrine (0/2), tumeurs
métastatiques d'origine inconnue (0/2), tumeurs du cerveau (0/2), tumeurs testiculaires (0/2), tumeurs de la peau (0/2), une tumeur du
côlon (0/1), une tumeur de l'estomac (0/1), une tumeur rectale (0/1), une tumeur du larynx (0/1) et une tumeur du thymus (0/1). (Nombre
total de cas anormaux évalués = 41).
PB0669 est recommandé pour la détection de chaîne légère lambda de l'ARNm.
Limites Spécifiques du Produit
Lambda Probe a été optimisée chez Leica Biosystems pour une utilisation avec Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine
Detection et les réactifs auxiliaires BOND. Les utilisateurs qui ne respectent pas les procédures de test recommandées prennent la
responsabilité de l'interprétation des résultats des patients dans ces conditions. Les durées du protocole doivent être déterminées
empiriquement, à cause des variations de fixation des tissus et de l'efficacité de la digestion enzymatique. RNA Negative Control Probe
devrait être réalisés lors de l'optimisation des conditions de révélation et des durées du protocole.
. Ne jamais pipeter les réactifs à la bouche et éviter le contact
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