Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 34

• Søk råd hos føderale, statlige eller lokale forskrifter for avhending av alle potensielt giftige komponenter
• Reduser mikrobiell forurensning av reagensene , eller en økning av ikke- spesifikk farging kan forekomme. Henting,
inkubasjonstidene eller andre enn de som er spesifisert temperaturer kan gi feilaktige resultater. Enhver slik endring skal godkjennes
av brukeren.
Bruksanvisninger
Lambda Probe ble utviklet for bruk på automatiserte BOND system (herunder Leica BOND-MAX-systemet og Leica BOND-III-systemet) i
kombinasjon med Anti-Fluorescein Antibody and BOND Polymer Refine Detection. Den anbefalte fargingsprotokollen for Lambda Probe
er ISH Protocol A. Enzymgjenhenting anbefales å bruke BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, i 15 minutter.
Passende vev- og reagenskontroller skal alltid brukes. Protokollen for vev- og reagenskontroller skal tilsvare Lambda Probe.
Kvalitetskontroll
Forskjeller i vevbehandling og tekniske prosedyrer i brukerens laboratorium kan medføre signifikant variasjon i resultatene,
nødvendiggjør regelmessig yter interne kontroller i tillegg til følgende prosedyrer.
Positiv vevskontroll
Brukes til å angi riktig forberedt vev og riktig fargeteknikker.
En positiv vevskontroll bør inkluderes for hvert sett med testforhold i hver fargekjøring. Et vev med svakt positiv farging er mer egnet enn
et vev med sterk positiv farging for optimal kvalitetskontroll og å detektere små nivåer av reagens degradering.
Negativ vevskontroll
Skal undersøkes etter den positive vev kontroll for å kontrollere spesifisiteten av merking av sonden til målet.
Alternativt, variasjonen av ulike celletyper som finnes i de fleste vevseksjoner ofte tilby negative kontrollområder, men dette bør
verifiseres av brukeren.
Negativ reagenskontroll
Bruk RNA Negative Control Probe PB0809 i stedet for Lambda Probe med en del av hver pasientprøve for å vurdere ikke-spesifikk
farging og tillate bedre tolkning av spesifikk farging på målet.
Positiv reagenskontroll
Bruk RNA Positive Control Probe PB0785 i stedet for Lambda Probe med en del av hver pasientprøve for å gi informasjon om bevaring
av nukleinsyrer i vevet, så vel som tilgjengeligheten av nukleinsyrer til sonden.
Hvis RNA Positive Control Probe unnlater å demonstrere positiv farging, bør resultater med prøvene anses som ugyldige.
Pasientvev
Undersøke pasient prøver farget med Lambda Probe til slutt. Positiv fargingsintensitet skal bli vurdert i sammenheng med hvilken som
helst ikke-spesifikk bakgrunnsfarging av RNA Negative Control Probe PB0809.
Forventede resultater
Normalt vev
PB0669 oppdaget kappa mRNA i B-celler i milten og tonsiller, så vel som den annen B-celle i et bredt spekter av vev inkludert bryst,
livmorhals, lever, spyttkjertel, parotid kjertel, binyrene, strupehodet, tynntarmen og tykktarmen. Precursor B-celler var også positive for
lambda mRNA i benmargen. Ekstra farging ble også oppdaget i epitelceller i skjoldbruskkjertelen, prostata, strupehode og spiserør,
tubuli i nyrene, sekresjonscellene i binyrene og Leydig-cellene. (Totalt antall evaluerte normale tilfeller = 109).
Tumorvev
PB0669 farget 4/6 plasmacellemyelomer. Ingen farging ble sett i T-cellelymfom (0/3), diffuse store B-cellelymfom (0/2), Hodgkins
lymfom (0/2), en Burkitt lymfom (0/1), lungesvulster (0/3), ovarietumorer (0/3), levertumorer (0/2), skjoldbruskkjertelsvulster (0/2),
spiserørsvulster (0/2), brystsvulster (0/2), metastatisk svulster med ukjent opprinnelse (0/2), hjernetumorer (0/2), testikkelsvulster (0/2),
hudtumorer (0/2), et kolon tumor (0/1), et magetumor (0/1), en rektal tumor (0/1), en svulst i strupehodet (0/1), og en tumor av thymus
(0/1). (Totalt antall evaluerte unormale tilfeller = 41).
PB0669 anbefales for oppdagelse av lambda lyskjede mRNA.
Produktspesifikke begrensninger
Lambda Probe har blitt optimalisert på Leica Biosystems for bruk med Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection og
BOND ekstra reagenser. Brukere som avviker fra anbefalte testprosedyrer må ta ansvar for tolkning av pasient resultater under disse
omstendighetene.
Protokollen kan variere på grunn av variasjoner i vev fiksering og effektiviteten av enzymatisk oppslutning, og må bestemmes empirisk.
RNA Negative Control Probe bør brukes når du optimaliserer gjenfinningsforhold og protokoll flere ganger.
Feilsøking
Referanse 6 kan hjelpe i forbedringstiltak.
Testprøver skal utfylles av faktiske vev- og reagenskontroller. Kontakt din lokale forhandler eller regionale kontor for Leica Biosystems for
rapportering av uvanlige flekker.
Videre informasjon
Ytterligere informasjon om in situ hybridisering med BOND reagenser, under overskriften Prinsipp for prosedyren, Materialer som er
nødvendige, forberedning, kvalitetskontroll, analysebekreftelse, tolkning av farging, symbol på etiketter og general begrensninger kan
finnes i "Bruk av BOND reagenser "i din BOND brukerdokumentasjon.
PB0669
Page 33