Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 58

• Výtisk bezpečnostního listu materiálu získáte od místního distributora nebo oblastní kanceláře společnosti Leica Biosystems, nebo
můžete navštívit webové stránky Leica Biosystems: www.LeicaBiosystems.com.
• Se vzorky, před fixací i po fixaci, a se všemi materiály, které s nimi přišly do kontaktu, je nutno zacházet, jako by mohly přenášet
infekci, a zlikvidovat je s použitím příslušných bezpečnostních opatření
reagencií a vzorků s kůží a sliznicemi. Pokud se reagencie nebo vzorky dostanou do kontaktu s citlivými oblastmi, omyjte je velkým
množstvím vody. Vyhledejte lékařskou pomoc.
• Údaje o likvidaci jakýchkoli potenciálně toxických komponent prostudujte ve federálních, státních nebo místních nařízeních.
• Minimalizujte mikrobiální kontaminaci reagencií, mohlo by dojít ke zvýšení výskytu nespecifického barvení.
• Získávání, inkubační doby nebo teploty jiné než specifikované mohou vést k chybným výsledkům. Všechny takové změny musí být
uživatelem validovány.
Návod k použití
Sonda Lambda Probe byla vyvinuta k použití v automatickém systému BOND (včetně systému Leica BOND-MAX a Leica BOND-III)
v kombinaci s protilátkami proti fluoresceinu a soupravou BOND Polymer Refine Detection. Doporučený protokol o barvení pro sondu
Lambda Probe je protokol ISH Protocol A. Odmaskování enzymu se doporučuje použitím soupravy BOND Enzyme Pretreatment Kit,
Enzyme 1 na 15 minut.
Vždy se musí použít příslušné tkáňové a reagenční kontroly. Protokol tkáňové a reagenční kontroly musí odpovídat kontrolám sondy
Lambda Probe.
Kontrola jakosti
Rozdíly ve zpracování tkání a v technických postupech v laboratoři uživatele mohou způsobit významnou variabilitu výsledků, což
vyžaduje kromě níže uvedených postupů i pravidelné provádění kontrol v laboratoři.
Pozitivní tkáňová kontrola
Používá se k průkazu správně připravených tkání a správných barvicích technik.
V každém barvicím cyklu musí být použita jedna pozitivní tkáňová kontrola pro každý soubor testovacích podmínek. Pro optimální
kontrolu jakosti a k detekci menšího stupně degradace reagencie je vhodnější tkáň se slabým pozitivním barvením než tkáň se silným
pozitivním barvením.
Negativní tkáňová kontrola
Musí být vyšetřena po pozitivní tkáňové kontrole k ověření specificity označení sondy podle cílové tkáně.
Alternativně často představuje místa negativní kontroly řada různých typů buněk přítomných ve většině tkáňových řezů, to ale musí
uživatel validovat.
Negativní reagenční kontrola
K vyhodnocení nespecifického barvení a umožnění lepší interpretace specifického barvení cílové tkáně použijte na řezu z každého
vzorku pacienta kontrolu RNA Negative Control Probe PB0809 namísto sondy Lambda Probe.
Pozitivní reagenční kontrola
K získání informací o konzervaci nukleových kyselin ve tkáni a přístupnosti nukleových kyselin pro sondu použijte na řezu z každého
vzorku pacienta kontrolu RNA Positive Control Probe PB0785 namísto sondy Lambda Probe. Pokud sonda RNA Positive Control Probe
nevykazuje pozitivní barvení, musí být výsledky testovaných vzorků považovány za neplatné.
Tkáň pacienta
Nakonec vyšetřete vzorky pacienta barvené pomocí sondy Lambda Probe. Intenzita pozitivního barvení musí být zhodnocena v kontextu
se vším nespecifickým barvením pozadí u sondy RNA Negative Control Probe PB0809.
Očekávané výsledky
Normální tkáně
Sonda PB0669 detekovala lambda lehké řetězce mRNA v B-buňkách ve slezině a mandlích stejně jako příležitostné B-buňky
v širokém spektru tkání včetně prsu, děložního hrdla, jater, slinné žlázy, příušní žlázy, nadledviny, hrtanu, tenkého a tlustého střeva.
Prekurzory B-buněk byly také pozitivní na lambda mRNA v kostní dřeni. Další barvení bylo také pozorováno u epiteliálních buněk
štítné žlázy, prostaty, hrtanu a jícnu, ledvinových tubulů, sekrečních buněk nadledvin a Leydigových buněk. (Celkový počet normálních
vyšetřovaných tkání = 109).
Abnormální tkáně
PB0669 barvil 4/6 myelomů plazmatických buněk. Žádné barvení nebylo pozorováno u T-buněčných lymfomů (0/3), difuzních
velkobuněčných B lymfomů (0/2), Hodgkinových lymfomů (0/2), Burkittova lymfomu (0/1), nádorů plic (0/3), ovariálních nádorů (0/3),
nádorů jater (0/2), nádorů štítné žlázy (0/2), nádorů jícnu (0/2), nádorů prsu (0/2), metastatických nádorů neznámého původu (0/2),
nádorů mozku (0/2), testikulárních nádorů (0/2), nádorů kůže (0/2), nádoru tlustého střeva (0/1), nádoru žaludku (0/1), rektálního nádoru
(0/1), nádoru hrtanu (0/1) a nádoru thymu (0/1). (Celkový počet vyšetřených abnormálních tkání = 41).
Sonda PB0669 je doporučena k detekci lambda lehkých řetězců mRNA.
Omezení specifická pro tento produkt
Sonda Lambda Probe byla společností Leica Biosystems optimalizována pro použití s protilátkami proti fluoresceinu, soupravou BOND
Polymer Refine Detection a s pomocnými reagenciemi BOND. Uživatelé, kteří se při vyšetření odchýlí od doporučeného postupu, musí
za těchto okolností přijmout odpovědnost za interpretaci výsledků u pacienta. Doby uvedené v protokolu se mohou lišit v důsledku
odchylek při fixaci tkání a účinnosti enzymatické digesce a musí být stanoveny empiricky. Při optimalizaci podmínek při získávání a dob
v protokolu musí být použita sonda RNA Negative Control Probe.
PB0669
Page 57
. Nikdy reagencie nepipetujte ústy a zabraňte kontaktu
5