Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 13

• Ein Exemplar des Sicherheitsdatenblattes erhalten Sie von Ihrer örtlichen Vertriebsfirma, von der Regionalniederlassung von Leica
Biosystems oder über die Webseite von Leica Biosystems unter www.LeicaBiosystems.com.
• Behandeln Sie Präparate vor und nach der Fixierung sowie sämtliche damit in Berührung kommenden Materialien so, als ob sie
Infektionen übertragen könnten und entsorgen Sie sie mit den entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen
niemals mit dem Mund und vermeiden Sie den Kontakt von Haut oder Schleimhäuten mit Reagenzien oder Präparaten. Falls
Reagenzien oder Präparate mit empfindlichen Bereichen in Kontakt kommen, spülen Sie diese mit reichlich Wasser. Holen Sie
anschließend ärztlichen Rat ein.
• Beachten Sie bei der Entsorgung potentiell giftiger Bestandteile die behördlichen und örtlichen Vorschriften.
• Mikrobielle Kontaminationen sollten minimiert werden, da es sonst zu einer Zunahme unspezifischer Färbungen kommen kann.
• Die Verwendung anderer als die angegebenen Retrievals, Inkubationszeiten oder Temperaturen kann zu fehlerhaften Ergebnissen
führen. Diesbezügliche Änderungen müssen vom Anwender selbst getestet werden.
Gebrauchsanweisung
Lambda Probe wurde zur Nutzung auf dem automatisierten BOND-System (bestehend aus dem Leica BOND-MAX-System und dem
Leica BOND-III-System) in Kombination mit Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection und BOND-Zusatzreagenzien
optimiert entwickelt. ISH Protocol A ist das empfohlene Färbeprotokoll für Lambda Probe. Es wird eine Enzymvorbehandlung unter
Anwendung von BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 für 15 Minuten bei empfohlen.
Es sind stets geeignete Gewebe- und Reagenzkontrollen zu nutzen. Das Protokoll für die Gewebe- und Reagenzkontrollen sollte dem
für Lambda Probe entsprechen.
Qualitätskontrolle
Unterschiede bei der Gewebebearbeitung und den technischen Verfahren im Labor des Benutzers können zu signifikanten
Schwankungen bei den Ergebnissen führen. Daher ist es wichtig, zusätzlich zu den folgenden Verfahren regelmäßige laborinterne
Kontrollen durchzuführen.
Positive Gewebekontrolle
Zeigt korrekt vorbereitete Gewebe und korrekte Färbetechniken an. In jedem Färbelauf sollte für jeden Satz Testbedingungen eine
positive Gewebekontrolle durchgeführt werden. Gewebe mit schwach positiver Färbung ist für die optimale Qualitätskontrolle und den
Nachweis kleiner Minderungen in der Reagenzleistung besser geeignet, als ein Gewebe mit stark positiver Färbung.
Negative Gewebekontrolle
Sollte im Anschluss an die positive Gewebekontrolle durchgeführt werden, um die Spezifität der Zielsondenmarkierung zu verifizieren.
Alternativ bietet die Vielfalt unterschiedlicher Zelltypen, die in den meisten Gewebeschnitten vorliegen, häufig Stellen für eine negative
Kontrolle. Jedoch sollte dies vom Benutzer verifiziert werden.
Negative Reagenzkontrolle
Zur Beurteilung einer unspezifischen Färbung und zur besseren Bewertung einer spezifischen Färbung an der Zielstelle ist mit einem
Schnitt jedes Patientenpräparates RNA Negative Control Probe PB0809 anstelle Lambda Probe zu verwenden.
Positive Reagenzkontrolle
Verwenden Sie RNA Positive Control Probe PB0785 anstelle Lambda Probe bei einem Schnitt jedes Patientenpräparates, um
Informationen über die Erhaltung von Nukleinsäuren in dem Gewebe und die Zugänglichkeit von Nukleinsäuren zu der Sonde zu
erhalten. Falls RNA Positive Control Probe keine positive Färbung nachweisen kann, sollten die mit den Testproben erzielten Ergebnisse
als ungültig betrachtet werden.
Patientengewebe
Die mit Lambda Probe gefärbten Patientenproben müssen zuletzt untersucht werden. Eine positive Färbeintensität ist im Kontext einer
unspezifischen Hintergrundfärbung der RNA Negative Control Probe PB0809 zu bewerten.
Erwartete Ergebnisse
Normale Gewebe
PB0669 detektierte Lambda-mRNA in B-Zellen von Milz und Tonsillen sowie gelegentlich in B-Zellen in einem breiten Spektrum von
Gewebeproben, einschl. Brust, Zervix, Leber, Speicheldrüse, Ohrspeicheldrüse, Nebenniere, Larynx, Dünndarm und Dickdarm.
B-Vorläuferzellen in Knochenmarkproben wurden ebenfalls auf Lambda-mRNA getestet. Darüber hinaus wurde eine Färbung in den
Epithelzellen von Schilddrüse, Prostata, Larynx und Ösophagus, den Tubuli der Niere, den sekretorischen Zellen der Nebenniere und in
Leydig-Zellen beobachtet. (Anzahl der insgesamt untersuchten Normalgewebeproben = 109).
Tumorgewebe
PB0669 färbte 4/6 Plasmozytomen. Beim T-Zell-Lymphom (0/3), diffusen großzelligen B-Zell-Lymphom (0/2), Hodgkin-Lymphom (0/2),
einem Burkitt-Lymphom (0/1), bei Tumoren von Lunge (0/3), Eierstöcken (0/3), Leber (0/2), Schilddrüse (0/2), Ösophagus (0/2), Brust
(0/2), metastatischen Tumoren unbekannten Ursprungs (0/2), Tumoren von Gehirn (0/2), Testikeln (0/2), Haut (0/2) und je einem Tumor
von Colon (0/1), Magen (0/1), Rektum (0/1), Larynx (0/1) und Thymus (0/1) wurde keine Färbung nachgewiesen. (Anzahl der insgesamt
untersuchten pathologischen Gewebeproben = 41).
PB0669 wird für die Bestimmung der Lambda-Leichtketten-mRNA empfohlen.
Produktspezifische Einschränkungen
Lambda Probe wurde von Leica Biosystems zur Verwendung mit em Anti-Fluorescein Antibody, dem BOND Polymer Refine Detection
und BOND-Zusatzreagenzien optimiert. Anwender, die andere als die empfohlenen Testverfahren verwenden, müssen unter diesen
Umständen die Verantwortung für die Auswertung der Patientenergebnisse übernehmen. Die Verfahrenszeiten können aufgrund von
Unterschieden in der Gewebefixierung und der Wirksamkeit der enzymatischen Verdauung variieren und müssen empirisch bestimmt
werden. Bei der Optimierung der Retrieval-Bedingungen und Verfahrenszeiten sollte RNA Negative Control Probe verwendet werden.
. Pipettieren Sie Reagenzien
5
PB0669
Page 12