Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 25

• Τα δείγματα, πριν και μετά τη μονιμοποίηση, καθώς και όλα τα υλικά που εκτίθενται σε αυτά, πρέπει να υποβάλλονται σε χειρισμό ως
δυνητικά μετάδοσης λοίμωξης και να απορρίπτονται με κατάλληλες προφυλάξεις
με το στόμα και αποφεύγετε την επαφή του δέρματος και των βλεννογόνων με αντιδραστήρια ή δείγματα. Εάν τα αντιδραστήρια ή τα
δείγματα έλθουν σε επαφή με ευαίσθητες περιοχές, πλύνετε με άφθονες ποσότητες νερού. Ζητήστε τη συμβουλή ιατρού.
• Συμβουλευτείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς ή τοπικούς κανονισμούς για απόρριψη τυχόν δυνητικώς τοξικών συστατικών.
• Ελαχιστοποιήστε τη μικροβιακή μόλυνση των αντιδραστηρίων, διότι διαφορετικά ενδέχεται να αυξηθεί η μη ειδική χρώση.
• Ανάκτηση, χρόνοι ή θερμοκρασίες επώασης διαφορετικές από εκείνες που καθορίζονται ενδέχεται να δώσουν εσφαλμένα
αποτελέσματα. Τυχόν τέτοια μεταβολή πρέπει να επικυρώνεται από το χρήστη.
Οδηγίες Χρήσης
Το Lambda Probe αναπτύχθηκε προς χρήση στο αυτοματοποιημένο σύστημα BOND (περιλαμβάνει το σύστημα Leica BOND-MAX και το
σύστημα Leica BOND-III), σε συνδυασμό με τα ακόλουθα: Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection και τα βοηθητικά
αντιδραστήρια BOND. Το συνιστώμενο πρωτόκολλο χρώσης για το Lambda Probe είναι το ISH Protocol A. Συνιστάται ενζυμική
προεπεξεργασία με χρήση του BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, για 15 λεπτά.
Θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται κατάλληλοι μάρτυρες ιστού και αντιδραστηρίου. Το πρωτόκολλο για τους μάρτυρες ιστού και
αντιδραστηρίου θα πρέπει να αντιστοιχεί στο πρωτόκολλο του Lambda Probe.
Ποιοτικός έλεγχος
Τυχόν διαφορές στην επεξεργασία των ιστών και τις τεχνικές διαδικασίες στο εργαστήριο του χρήστη ενδέχεται να προκαλέσουν
σημαντική μεταβλητότητα στα αποτελέσματα, καθιστώντας αναγκαία την τακτική εκτέλεση εσωτερικών ελέγχων επιπρόσθετα προς τις
ακόλουθες διαδικασίες.
Θετικός μάρτυρας ιστού
Χρησιμοποιείται για να υποδεικνύει σωστά παρασκευασμένους ιστούς και σωστές τεχνικές χρώσης. Θα πρέπει να περιλαμβάνεται
ένας θετικός μάρτυρας ιστού για κάθε σύνολο συνθηκών εξέτασης σε κάθε εκτέλεση χρώσης. Ένας ιστός με ασθενή θετική χρώση είναι
καταλληλότερος από έναν ιστό με ισχυρή θετική χρώση για βέλτιστο ποιοτικό έλεγχο και για την ανίχνευση πολύ μικρών επιπέδων τυχόν
αποδόμησης των αντιδραστηρίων.
Αρνητικός μάρτυρας ιστού
Θα πρέπει να εξετάζεται μετά από το θετικό μάρτυρα ιστού για επαλήθευση της ειδικότητας της σήμανσης του ανιχνευτή στο στόχο.
Εναλλακτικά, η ποικιλία διαφόρων κυτταρικών τύπων που υπάρχουν στις περισσότερες τομές ιστών παρέχει συχνά θέσεις αρνητικού
μάρτυρα, αλλά αυτό θα πρέπει να επαληθεύεται από το χρήστη.
Αρνητικός μάρτυρας αντιδραστηρίου
Χρησιμοποιήστε το RNA Negative Control Probe PB0809 αντί του Lambda Probe με μια τομή κάθε δείγματος ασθενούς, για να
αξιολογήσετε τη μη ειδική χρώση και να επιτρέψετε την καλύτερη ερμηνεία της ειδικής χρώσης στο στόχο.
Θετικός μάρτυρας αντιδραστηρίου
Χρησιμοποιήστε το RNA Positive Control Probe PB0785 αντί του Lambda Probe με μια τομή κάθε δείγματος ασθενούς, για να παράσχετε
πληροφορίες σχετικά με τη διατήρηση νουκλεϊκών οξέων στον ιστό, καθώς και την προσπελασιμότητα των νουκλεϊκών οξέων από τον
ανιχνευτή. Εάν το RNA Positive Control Probe δεν παρουσιάζει θετική χρώση, τα αποτελέσματα με τα δείγματα της εξέτασης θα πρέπει
να θεωρούνται άκυρα.
Ιστός ασθενούς
Εξετάστε τα δείγματα ασθενούς που έχουν υποστεί χρώση με το Lambda Probe στο τέλος. Η ένταση της θετικής χρώσης θα πρέπει να
εκτιμάται στο πλαίσιο τυχόν μη ειδικής χρώσης υποβάθρου του RNA Negative Control Probe PB0809.
Αναμενόμενα Αποτελέσματα
Φυσιολογικοί ιστοί
Το PB0669 ανίχνευσε λάμδα mRNA σε Β κύτταρα του σπλήνα και της αμυγδαλής, καθώς και περιστασιακά Β κύτταρα σε μεγάλο εύρος
ιστών, όπως στο μαστό, στον τράχηλο της μήτρας, στο ήπαρ, στους σιελογόνους αδένες, στους παρωτιδικούς αδένες, στα επινεφρίδια,
στο λάρυγγα, στο λεπτό έντερο και στο παχύ έντερο. Θετικά για λάμδα mRNA ήταν επίσης πρόδρομα Β κύτταρα στο μυελό των οστών.
Επιπρόσθετη χρώση παρατηρήθηκε επίσης σε επιθηλιακά κύτταρα του θυρεοειδή, του προστάτη, του λάρυγγα και του οισοφάγου, των
νεφρικών σωληναρίων, σε εκκριτικά κύτταρα των επινεφριδίων και σε κύτταρα Leydig. (Συνολικός αριθμός φυσιολογικών περιστατικών
που αξιολογήθηκαν = 109).
Νεοπλασματικοί ιστοί
Κατά τη χρήση του PB0669 παρατηρήθηκε χρώση σε 4/6 μυελώματα πλασματοκυττάρων. Δεν παρατηρήθηκε χρώση σε λεμφώματα
Τ κυττάρων (0/3), διάχυτα λεμφώματα μεγάλων B κυττάρων (0/2), λεμφώματα Hodgkin (0/2), ένα λέμφωμα Burkitt (0/1), όγκους των
πνευμόνων (0/3) όγκους των ωοθηκών (0/3), όγκους του ήπατος (0/2), όγκους του θυρεοειδή (0/2), όγκους του οισοφάγου (0/2), όγκους
του μαστού (0/2), μεταστατικούς όγκους αγνώστου αιτιολογίας (0/2), όγκους του εγκεφάλου (0/2), όγκους των όρχεων (0/2), όγκους του
δέρματος (0/2), έναν όγκο στο κόλον (0/1), έναν όγκο του στομάχου (0/1), έναν όγκο του ορθού (0/1), έναν όγκο του λάρυγγα (0/1) και
έναν όγκο του θύμου αδένα (0/1). (Συνολικός αριθμός μη φυσιολογικών περιστατικών που αξιολογήθηκαν = 41).
Το PB0669 συνιστάται για την ανίχνευση mRNA λάμδα ελαφριάς αλυσίδας.
Ειδικοί Περιορισμοί Του Προϊόντος
Το Lambda Probe έχει βελτιστοποιηθεί στην Leica Biosystems για χρήση με το Anti-Fluorescein Antibody, το Bond Polymer Refine
Detection και τα βοηθητικά αντιδραστήρια BOND. Χρήστες που αποκλίνουν από τις συνιστώμενες διαδικασίες εξέτασης πρέπει να
αποδέχονται την ευθύνη για ερμηνεία των αποτελεσμάτων ασθενών υπό τις συνθήκες αυτές. Οι χρόνοι του πρωτοκόλλου ενδέχεται να
διαφέρουν, λόγω της μεταβλητότητας της μονιμοποίησης του ιστού και της αποτελεσματικότητας της ενζυμικής πέψης και πρέπει να
προσδιορίζονται εμπειρικά. Κατά τη βελτιστοποίηση των συνθηκών ανάκτησης και των χρόνων πρωτοκόλλου, πρέπει να χρησιμοποιηθει
RNA Negative Control Probe.
. Μην αναρροφάτε ποτέ με πιπέτα τα αντιδραστήρια
5
PB0669
Page 24