Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 19

• Para obter uma cópia da Ficha de Dados de Segurança do Material, entre em contacto com o seu distribuidor local ou sucursal
regional da Leica Biosystems ou, em alternativa, visite o site da Leica Biosystems na internet, www.LeicaBiosystems.com.
• As amostras, antes e depois da fixação, e todo o material que a elas seja exposto, devem ser manipulados como se fossem capazes
de transmitir infecção e eliminados usando as precauções adequadas
a pele e membranas mucosas e reagentes ou amostras. Se reagentes ou amostras entrarem em contacto com áreas sensíveis,
lave-as com uma quantidade abundante de água. Consulte um médico.
• Consulte os regulamentos federais, estatais e locais relativamente à eliminação de quaisquer componentes potencialmente tóxicos.
• Minimize a contaminação microbiana dos reagentes ou poderá ocorrer um aumento da coloração inespecífica.
• A utilização de tempos e temperaturas de recuperação e incubação diferentes dos especificados pode produzir resultados erróneos.
Qualquer alteração deste tipo deve ser validada pelo utilizador.
Instruções de Utilização
Lambda Probe foi desenvolvido para utilização no sistema automatizado BOND (inclui o sistema Leica BOND-MAX e o sistema Leica
BOND-III) juntamente com Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection e reagentes auxiliares BOND. O protocolo de
coloração recomendado para Lambda Probe é o ISH Protocol A. Recomenda-se o pré-tratamento enzimático com BOND Enzyme
Pretreatment Kit, Enzyme 1, durante 15 minutos.
Devem ser sempre utilizados os controlos apropriados de tecidos e reagentes. O protocolo para os controlos de tecidos e reagentes
deve corresponder ao protocolo de Lambda Probe.
Controlo de qualidade
As diferenças no processamento de tecidos e nos procedimentos técnicos do laboratório do utilizador podem produzir uma variabilidade
significativa de resultados, exigindo a realização regular de controlos internos além dos procedimentos a seguir descritos.
Controlo positivo do tecido
Utilizado para indicar os tecidos correctamente preparados e as técnicas de coloração adequadas. Cada conjunto de condições de
teste, em cada processo de coloração, deve incluir um controlo positivo do tecido. Um tecido com uma coloração positiva fraca é mais
adequado do que um tecido com uma coloração positiva forte para assegurar um controlo de qualidade óptimo e para detectar níveis
mínimos de degradação dos reagentes.
Controlo negativo do tecido
Este deve ser examinado depois do controlo positivo do tecido para verificar a especificidade da marcação da sonda em relação ao
alvo.
Alternativamente, a variedade de diferentes tipos de células presentes na maior parte dos cortes tecidulares oferece frequentemente
locais de controlo negativo, no entanto, isto deve ser verificado pelo utilizador.
Controlo negativo do reagente
Utilize RNA Negative Control Probe PB0809 em vez de Lambda Probe com um corte de cada amostra do doente para avaliar a
coloração não específica e permitir uma melhor interpretação da coloração específica no alvo.
Controlo positivo do reagente
Utilize RNA Positive Control Probe PB0785 em vez de Lambda Probe com um corte de cada amostra do doente para dar informações
sobre a conservação dos ácidos nucleicos no tecido e sobre a acessibilidade dos ácidos nucleicos à sonda. Se RNA Positive Control
Probe não demonstrar uma coloração positiva, os resultados obtidos com as amostras do teste devem ser considerados inválidos.
Tecido do doente
Examine, no fim, as amostras do doente coradas com Lambda Probe. A intensidade da coloração positiva deve ser avaliada no contexto
de qualquer coloração não específica de fundo de RNA Negative Control Probe PB0809.
Resultados Esperados
Tecidos normais
O PB0669 detetou ARNm lambda em células B no baço e nas amígdalas, bem como células B ocasionais numa grande variedade
de tecidos, incluindo tecido mamário, do colo do útero, fígado, glândula salivar, glândula parótida, glândula adrenal, laringe, intestino
delgado e intestino grosso. As células B precursoras também obtiveram resultados positivos para ARNm lambda na medula óssea.
Foi também observada uma coloração adicional em células epiteliais da tiróide, próstata, laringe e esófago, túbulos renais, células
secretoras nas glândulas adrenais e células de Leydig. (Número total de casos normais avaliados = 109).
Tecidos tumorais
O PB0669 corou 4/6 mielomas das células do plasma. Não foi observada coloração em linfomas das células T (0/3), linfomas das
células B grandes difusas (0/2), linfomas de Hodgkin (0/2), um linfoma de Burkitt (0/1), tumores pulmonares (0/3), tumores ováricos
(0/3), tumores hepáticos (0/2), tumores da tiróide (0/2), tumores esofágicos (0/2), tumores mamários (0/2), tumores metastáticos de
origem desconhecida (0/2), tumores cerebrais (0/2), tumores testiculares (0/2), tumores da pele (0/2), um tumor do cólon (0/1), um
tumor do estômago (0/1), um tumor do reto (0/1), um tumor da laringe (0/1) e um tumor do timo (0/1). (Número total de casos anormais
avaliados = 41).
O PB0669 é recomendado para a deteção de ARNm da cadeia leve lambda.
Limitações Específicas do Produto
A Lambda Probe foi optimizada na Leica Biosystems para utilização com Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection e
reagentes auxiliares BOND. Utilizadores que se desviem dos procedimentos de teste recomendados devem assumir a responsabilidade
pela interpretação dos resultados dos doentes nestas circunstâncias. Os tempos de protocolo podem variar, devido a variações na
fixação tecidular e na eficácia de digestão enzimática , devendo ser determinados de forma empírica. Os RNA Negative Control Probe
deve ser utilizados quando se optimizam as condições de recuperação e os tempos do protocolo.
. Nunca pipete reagentes com a boca e evite o contacto entre
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