Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 55

• Kopijo varnostnega lista lahko dobite pri lokalnem distributerju ali regionalni pisarni družbe Leica Biosystems ali na spletnem mestu
www.LeicaBiosystems.com.
• Z vzorci, pred fiksiranjem in po njem, in vsemi materiali, s katerimi so prišli v stik, morate rokovati, kot da bi lahko prenašali okužbe,
in pri njihovem odstranjevanju upoštevati ustrezne previdnostne ukrepe.
in vzorci ne pridejo v stik s kožo ali sluznicami. Če reagenti ali vzorci pridejo v stik z občutljivimi deli, jih izperite z obilo vode. Poiščite
zdravniško pomoč.
• Sledite zveznim, državnim ali lokalnim predpisom za odstranjevanje katerih koli morebitno strupenih sestavin.
• Pazite, da ne pride do mikrobne okužbe reagentov, saj lahko povzroči nespecifično barvanje.
• Če uporabite čas ali temperature razkrivanja in inkubacije, ki se razlikujejo od navedenih, lahko pridobite napačne rezultate.
Uporabnik mora validirati morebitne spremembe.
Navodila za uporabo
Sonda Lambda Probe je bila razvita za uporabo na avtomatiziranem sistemu BOND (vključuje sistem Leica BOND-MAX in sistem Leica
BOND-III) skupaj s sistemom BOND Polymer Refine Detection. Priporočeni protokol za barvanje za sondo Lambda Probe ISH Protocol
A. Priporočen način pridobivanja encimov je z uporabo BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 za 15 minut.
Vedno morate uporabljati ustrezne kontrolna tkiva in reagente. Protokol za kontrolna tkiva in kontrolne reagente mora biti primeren za
test s sondo Lambda Probe.
Kontrola kakovosti
Razlike pri obdelavi tkiva in tehničnih postopkih v laboratoriju uporabnika lahko vodijo do precejšnje variabilnosti rezultatov, kar zahteva
redne interne kontrole učinkovitosti poleg spodaj navedenih postopkov.
Pozitivni kontrolni vzorci tkiva
Uporabite jih za opredelitev pravilno pripravljenih tkiv in ustreznih tehnik barvanja.
Pri vsakem postopku barvanja morate vsakemu sklopu preizkusnih pogojev dodati en pozitiven kontrolni vzorec tkiva. Za najboljšo
kontrolo kakovosti in zaznavanje manjših ravni razpadanja reagentov je tkivo s šibkim pozitivnim obarvanjem bolj primerno kot tkivo
z močnim pozitivnim obarvanjem.
Negativni kontrolni vzorci tkiva
Pregledati jih morate po pregledu pozitivnih kontrolnih vzorcev tkiva, da preverite specifičnost označevanja tarče s sondo.
Drugače pa se kot negativni kontrolni vzorci pogosto uporablja vrsta različnih celic, ki so prisotne v večini rezin tkiv, vendar pa mora tako
uporabo preveriti uporabnik.
Negativni kontrolni reagent
Za oceno nespecifičnega obarvanja in boljšo razlago specifičnega obarvanja uporabite kontrolni reagent RNA Negative Control Probe
PB0809 namesto sonde Lambda Probe z eno rezino vsakega vzorca bolnika.
Pozitivni kontrolni reagent
Da preverite ohranjenost nukleinskih kislin v tkivu ter dostopnost nukleinskih kislin sondi, uporabite kontrolni reagent RNA Positive
Control Probe PB0785 namesto sonde Lambda Probe z eno rezino vsakega vzorca bolnika. Če sonda RNA Positive Control Probe ne
kaže pozitivnega obarvanja, morate rezultate vzorcev šteti za neveljavne.
Bolnikovo tkivo
Nazadnje preglejte bolnikove vzorce, obarvane s sondo Lambda Probe. Intenzivnost pozitivnega obarvanja morate oceniti v kontekstu
morebitnega nespecifičnega obarvanja ozadja v kontrolnem vzorcu z izdelkom RNA Negative Control Probe PB0809.
Pričakovani rezultati
Normalna tkiva
PB0669 je zaznal lahko verigo Lambda mRNA v B-celicah v vranici in mandljih ter občasne B-celice v širokem naboru tkiv, vključno
s prsmi, materničnim vratom, jetrih, slinavko, obušesnimi žlezami, nadledvično žlezo, grlom ter tankem in debelem črevesju. Predhodne
B-celice so bile pozitivne tudi za Lambda mRNA v kostnem mozgu. Dodatno obarvanje je bilo zaznano tudi v epitelijskih celicah ščitnice,
prostate, grla in požiralnika, v tubulih ledvic, sekretornih celicah v nadledvičnih žlezah in Leydigovih celicah. (Skupno število ocenjenih
normalnih primerov = 109).
Nenormalna tkiva
PB0669 je obarval 4/6 mielomov plazematk. Obarvanja niso opazili v T-celičnih limfomih (0/2), difuznih velikih B-celičnih limfomih (0/2),
Hodgkinovih limfomih (0/2), Burkintonovem limfomu (0/1), pljučnih tumorjih (0/3), tumorjih na jajčnikih (0/3), tumorjih jeter (0/3), tumorjih
ščitnice (0/2), tumorjih požiralnika (0/2), tumorjih dojke (0/2), metastatskih tumorjih neznanega izvora (0/2), možganskih tumorjih (0/2),
tumorjih testisov (0/2), tumorjih kože (0/2), tumorju debelega črevesa (0/1), tumorju želodca (0/1), tumorju rektuma (0/1), tumorju grla
(0/1) in tumorju priželjca (0/1). (Skupno število ocenjenih anomalnih primerov = 41).
PB0669 je priporočena za zaznavanje lahke verige Lambda mRNA.
Specifične omejitve izdelka
Družba Leica Biosystems je sondo Lambda Probe optimizirala za uporabo s protitelesom proti fluorosceinu, s sistemom BOND Polymer
Refine Detection in pomožnimi reagenti BOND. Uporabniki, ki odstopijo od priporočenih preizkusnih postopkov, morajo prevzeti
odgovornost za razlago bolnikovih rezultatov pod temi pogoji. Trajanje protokola se lahko spreminja zaradi sprememb pri fiksaciji tkiva in
učinkovitosti encimske razgradnje, zato ga je treba določiti empirično. Pri optimizaciji pogojev pridobivanja in trajanja protokola morate
uporabiti izdelek RNA Negative Control Probe.
Nikoli ne pipetirajte reagentov skozi usta; pazite, da reagenti
5
PB0669
Page 54