Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH Lambda Probe PB0669 Mode D'emploi page 10

• I campioni, prima e dopo la fissazione, e tutti i materiali esposti ad essi devono essere manipolati come potenziali vettori di infezione
e smaltiti con le opportune precauzioni
con la pelle e le membrane mucose. Se un reagente o un campione viene a contatto con superfici sensibili, lavare abbondantemente
con acqua. Consultare un medico.
• Consultare la normativa nazionale, regionale o locale vigente per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici.
• Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti per evitare il rischio di una colorazione non specifica.
• Tempi o temperature di incubazione diversi da quelli specificati possono fornire risultati erronei. Ogni eventuale modifica deve essere
validata dall'utente.
Istruzioni per L'uso
Lambda Probe è stato sviluppato per l'uso sul sistema BOND automatizzato (include il sistema Leica BOND-MAX e il sistema Leica
BOND-III) unitamente a Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection e con i reagenti ausiliari BOND. Il protocollo di
colorazione raccomandato per Lambda Probe è ISH Protocol A. Si raccomanda un pretrattamento enzimatico usando BOND Enzyme
Pretreatment Kit, Enzyme 1 per 15 minuti.
Usare sempre controlli appropriati dei tessuti e dei reagenti. Il protocollo per i controlli dei tessuti e dei reagenti deve corrispondere a
quello di Lambda Probe.
Controllo di qualità
Differenze nella lavorazione del tessuto e nei procedimenti tecnici in uso presso il laboratorio dell'utente possono produrre una
discrepanza significativa nei risultati, rendendo necessaria la regolare esecuzione di controlli interni in aggiunta alle procedure descritte
di seguito.
Controllo positivo del tessuto
È usato per indicare tessuti correttamente preparati e tecniche di colorazione appropriate. Per ogni gruppo di condizioni del test in ogni
ciclo di colorazione, deve essere incluso un controllo positivo del tessuto. Un tessuto a debole colorazione positiva è più adatto di uno a
forte colorazione positiva per un controllo di qualità ottimale e per rilevare livelli minimi di degradazione del reagente.
Controllo negativo del tessuto
Va esaminato dopo il controllo positivo del tessuto per verificare la specificità della marcatura della sonda sul bersaglio.
In alternativa, la varietà di tipi cellulari diversi presenti nella maggior parte delle sezioni tissutali offre spesso siti di controllo negativo, ma
questo va verificato dall'utente.
Controllo negativo del reagente
Usare RNA Negative Control Probe PB0809 al posto di Lambda Probe con una sezione di ogni campione del paziente per valutare la
colorazione aspecifica e per consentire una migliore interpretazione della colorazione specifica in corrispondenza del sito bersaglio.
Controllo positivo del reagente
Usare RNA Positive Control Probe PB0785 al posto di Lambda Probe con una sezione di ogni campione del paziente per fornire
informazioni sulla preservazione degli acidi nucleici nel tessuto nonché sull'accessibilità degli acidi nucleici alla sonda. Se RNA Positive
Control Probe non dimostra alcuna colorazione positiva, i risultati dei campioni analizzati vanno considerati non validi.
Tessuto del paziente
Per ultimi, esaminare i campioni del paziente colorati con Lambda Probe. L'intensità della colorazione positiva va analizzata nel contesto
di qualsiasi colorazione aspecifica di fondo di RNA Negative Control Probe PB0809.
Risultati Attesi
Tessuti normali
PB0669 ha rilevato mRNA lambda nelle cellule B di milza e tonsille, oltre che in cellule B occasionali in una vasta gamma di tessuti, tra
cui seno, cervice, fegato, ghiandole salivari, ghiandola parotide, ghiandola surrenale, laringe, intestino tenue e intestino crasso. Anche le
cellule B da precursore sono risultate positive all'mRNA lambda nel midollo osseo. È stata rilevata una colorazione supplementare anche
nelle cellule epiteliali di tiroide, prostata, laringe, endometrio ed esofago, tubuli renali, cellule secretive nelle ghiandole surrenali e cellule
di Leydig. (Numero totale di casi normali esaminati = 109).
Tessuti neoplastici
PB0669 ha colorato 4/6 mielomi delle plasmacellule. Non è stata riscontrata colorazione nei linfomi a cellule T (0/3), linfomi diffusi a
grandi cellule B (0/2), linfomi di Hodgkin (0/2), linfoma di Burkitt (0/1), tumori ai polmoni (0/3), tumori alle ovaie (0/3), tumori al fegato
(0/2), tumori tiroidei (0/2), tumori esofagei (0/2), tumori mammari (0/2), tumori metastatici di origine ignota (0/2), tumori al cervello (0/2),
tumori testicolari (0/2), tumori della pelle (0/2), tumore del colon (0/1), tumore allo stomaco (0/1), tumore del retto (0/1), tumore della
laringe (0/1) e tumore del timo (0/1). (Numero totale di casi anormali esaminati = 41).
PB0669 è consigliata per il rilevamento di mRNA catena leggera lambda.
Limitazioni Specifiche del Prodotto
La Lambda Probe è stata ottimizzata da Leica Biosystems per l'uso con l'Anti-Fluorescein Antibody, il BOND Polymer Refine
Detection e con i reagenti ausiliari BOND. Gli utenti che modificano le procedure raccomandate devono assumersi la responsabilità
dell'interpretazione dei risultati relativi ai pazienti in tali circostanze. I tempi del protocollo possono variare in base alle variazioni nella
fissazione del tessuto e nell'efficienza della digestione enzimatica e devono essere definiti in modo empirico. Nell'ottimizzazione delle
condizioni di riconoscimento e dei tempi del protocollo si devono impiegare del RNA Negative Control Probe.
Individuazione e Risoluzione dei Problemi
Il riferimento bibliografico n. 6 può essere di aiuto per le azioni di rimedio.
I campioni del test devono essere completati dagli adeguati controlli dei tessuti e dei reagenti.
Per riferire una colorazione inusuale rivolgersi al distributore locale o all'ufficio di zona di Leica Biosystems.
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. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni
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