Alkalmazási Terület - Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Katalógusszám: DS9477
Alkalmazási terület
Ez a detektáló rendszer in vitro diagnosztikai használatra szolgál.
A ChromoPlex 1 Dual Detection biotinmentes, polimer tormaperoxidázhoz (horseradish peroxidase, HRP) és polimer alkalikus
foszfatázhoz (alkaline phosphatase, AP) kötődő antitest-konjugáló rendszer a szövethez kötött egér és nyúl IgG elsődleges antitestek
kimutatására. Formalinban fixált, paraffinba ágyazott szövet metszeteinek festésére szolgál BOND automata rendszeren (így a Leica
BOND-MAX rendszer vagy a Leica BOND-III rendszer)
Minden festődés meglétének vagy hiányának klinikai értelmezését morfológiai vizsgálatokkal kell kiegészíteni. A megfelelő kontrollok
kiértékelését a beteg klinikai kórtörténete és egyéb diagnosztikai vizsgálatok figyelembevételével, képzett patológusnak kell elvégeznie.
A ChromoPlex 1 Dual Detection kitet a helyes laboratóriumi gyakorlatnak megfelelően, szövetkontrollokkal kell alkalmazni. A biztonság
kedvéért a laboratóriumok minden betegminta festését pozitív, negatív, illetve szükség szerint más szövetspecikus kontrollokkal
párhuzamosan végezzék el.
Összefoglalás és magyarázat
Az immunhisztokémiai módszerek antigének jelenlétének kimutatására szolgálnak szövetekben és sejtekben (lásd a „BOND reagensek
használata" című részt a BOND felhasználói dokumentációban).
A ChromoPlex 1 Dual Detection új kontrollált polimerizáló technológiát alkalmaz a polimer HRP-kötő és AP-kötő antitest-konjugátumok
előállításához. A detektáló rendszer nem alkalmaz sztreptavidint és biotint, ezáltal kiiktatja az endogén biotin eredményeképp létrejövő
nem specifikus festődést.
A ChromoPlex 1 Dual Detection az alábbi módon működik:
• A rendszer inkubálja a mintát hidrogén-peroxidban az endogén peroxidázaktivitás megszüntetése céljából.
• A felhasználó által biztosított specifikus elsődleges egér és nyúl antitestkoktélt kell alkalmazni a metszeten.
• A Poly-HRP IgG reagens lokalizálja az egér antitesteket.
• A Poly-AP IgG reagens lokalizálja a nyúl antitesteket.
• Az első kromogén szubsztrát, a 3,3'-diaminobenzidin-tetrahidroklorid-hidrát (DAB) barna csapadékként megjeleníti az egér antitesteket.
• A második kromogén szubsztrát (Fast Red) vörös csapadékként megjeleníti a nyúl antitesteket.
• A hematoxilin (kék) kontrasztfesték lehetővé teszi a sejtmagok megjelenítését.
Ha a ChromoPlex 1 Dual Detection kitet BOND automata rendszerrel együtt használják, csökken az emberi hibák lehetősége, és
mérsékelhetők az egyes reagensek hígításából, a manuális pipettázásból és a reagensek alkalmazásából származó eredendő eltérések.
Biztosított reagensek
A biztosított reagensmennyiség 25 önálló BOND megfestési sorozathoz vagy legfeljebb 100 tárgylemezhez elég.
Ahhoz, hogy a detektáló rendszerrel a maximális 100 tárgylemez legyen vizsgálható, a tárgylemezeket tárgylemezfestő készletenként
legalább 4-esével kell csoportosítani. 4-nél kevesebb tárgylemezt tartalmazó sorozatok alkalmazásával kevesebb tárgylemez
megfestése lehetséges.
1. Peroxide Block (15 ml) 3–4%-os hidrogén-peroxid.
2. Polymer mHRP (15 ml) Poly-HRP egér ellenes, tris-pufferelt sóoldatban 10 térfogatszázalék állati szérumot és 0,1%
950-et tartalmaz.
3. Polymer rAP (15 ml) Poly-AP nyúl ellenes, tris-pufferelt sóoldatban 10 térfogatszázalék állati szérumot és 0,09%
950-et tartalmaz.
4. DAB Part 1 (2 ml) 66 mM 3,3'-diaminobenzidin-tetrahidroklorid-hidrát stabilizáló oldatban.
5. DAB Part B (35 ml) ≤0,1 térfogatszázalékos hidrogén-peroxid stabilizáló oldatban.
6. Red Part A (5,5 ml) aktivátor, 0,5% ProClin™ 950-et tartalmaz.
7. Red Part B (1,0 ml) szubsztrát.
8. Red Part C (1,0 ml) szubsztrát.
9. Red Part D (35 ml) pufferoldat, 0,5% ProClin™ 950-et tartalmaz.
10. Hematoxylin DS9477 (15 ml) <0,1% hematoxilin.
Hígítás és elegyítés
A ChromoPlex 1 Dual Detection kit a BOND rendszerrel való használathoz optimalizált.
Nem szükséges a reagensek feloldása, elegyítése, hígítása vagy titrálása.
Szükséges, de nem biztosított anyagok
A ChromoPlex 1 Dual Detection reagensekkel kompatibilis fedőanyagok (lásd Óvintézkedések).
A minta kezeléséhez és a BOND rendszerrel végzett immunhisztokémiai festéshez szükséges anyagok teljes listáját lásd a BOND
felhasználói dokumentáció „BOND reagensek használata" című részében.
Tárolás és stabilitás
2–8 °C-on tárolandó. Tilos lefagyasztani. Ne használja a terméket a tálca markolatán feltüntetett lejárati dátum után. Felhasználás után
azonnal tegye vissza 2–8 °C közötti hőmérsékletre.
DS9477
Page 36
ProClin™
ProClin™