Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 45

ChromoPlex 1 Dual Detection BOND
Nr katalogowy: DS9477
Przeznaczenie
Ten odczynnik jest przeznaczony do diagnostyki in vitro.
ChromoPlex 1 Dual Detection jest pozbawionym biotyny systemem sprzężonych przeciwciał zawierającym linker polimerowy
peroksydazy chrzanowej (HRP) i linker polimerowy fosfatazy alkalicznej (AP) do wykrywania pierwszorzędowych przeciwciał tkankowych
mysich i króliczych IgG. Przeznaczony do barwienia skrawków tkanki utrwalonej w formalinie, zatopionej w parafinie przy użyciu
automatycznego systemu BOND (w tym systemów Leica BOND-MAX i Leica BOND-III).
Kliniczną interpretację wybarwienia lub jego braku należy uzupełnić badaniami morfologicznymi. Odpowiednie kontrole powinien
przeprowadzić wykwalifikowany patolog w kontekście historii choroby pacjenta oraz innych badań diagnostycznych.
The ChromoPlex 1 Dual Detection musi być stosowane zgodnie z dobrymi praktykami laboratoryjnymi stosowanymi w kontroli tkanek.
Dla pewności laboratoria powinny barwić wszystkie próbki pobrane od pacjenta, stosując potrzebne kontrole pozytywne, negatywne
i inne kontrole specyficzne dla danej tkanki.
Podsumowanie i objaśnienie
W celu wykazania obecności antygenów w tkankach i komórkach (zob. „Korzystanie z odczynników BOND" w dokumentacji użytkownika
BOND) można skorzystać z technik immunohistochemicznych.
ChromoPlex 1 Dual Detection wykorzystuje nową technologię kontrolowanej polimeryzacji do przygotowania sprzężonych przeciwciał
zawierających polimeryczny linker HRP i AP. Ten system detekcji nie wykorzystuje streptawidyny ani biotyny, co pozwala wyeliminować
ryzyko niespecyficznego barwienia spowodowanego biotyną endogenną.
ChromoPlex 1 Dual Detection działa następująco:
• Próbkę inkubuje się z nadtlenkiem wodoru, aby stłumić endogenną aktywność peroksydazy.
• Stosowana jest mieszanka specyficznych przeciwciał pierwszorzędowych mysich i króliczych dostarczonych przez użytkownika.
• Odczynnik Poly-HRP IgG lokalizuje mysie przeciwciała.
• Odczynnik Poly-AP IgG lokalizuje królicze przeciwciała.
• Pierwszy chromogen substratu, tetrachlorowodorek 3,3'-diaminobenzydyny (DAB), wizualizuje mysie przeciwciała, wytwarzając
brązowy osad.
• Drugi chromogen substratu (Fast Red) wizualizuje królicze przeciwciała za pomocą czerwonego osadu.
• Barwienie kontrastowe hematoksyliną (niebieską) umożliwia wizualizację jąder komórkowych.
Używanie ChromoPlex 1 Dual Detection w połączeniu z automatycznym systemem BOND ogranicza prawdopodobieństwo popełnienia
błędu przez człowieka i nieodłączną zmienność wynikającą z indywidualnego rozcieńczania odczynnika, ręcznego pipetowania
i stosowania odczynnika.
Odczynniki znajdujące się w zestawie
Dostarczone odczynniki wystarczą do przeprowadzenia 25 pojedynczych serii barwienia BOND lub maksymalnie 100 preparatów.
Aby uzyskać maksymalnie 100 preparatów w tym samym systemie detekcji, w pojemniku do barwienia należy umieścić przynajmniej
4 preparaty. Zastosowanie wsadu w ilości mniejszej niż 4 spowoduje mniejszą ilość zabarwionych preparatów.
1. Peroxide Block (15 ml) 3-4% nadtlenek wodoru.
2. Polymer mHRP (15 mL) anty-mysi polimer HRP zawierający 10% (v/v) zwierzęcą surowicę w roztworze soli fizjologicznej
buforowanym odczynnikiem Tris i 0,1%
3. Polymer rAP (15 mL) anty-mysi polimer HRP zawierający 10% (v/v) surowicę zwierzęcą w roztworze soli fizjologicznej buforowanego
odczynnikiem Tris i 0,09% ProClin™ 950.
4. DAB Part 1 (2 ml) 66 mM uwodnionego tetrachlorowodorku 3,3'-diaminobenzydyny w roztworze stabilizowanym.
5. DAB Part B (35 ml) ≤0,1% (v/v) Nadtlenek wodoru w roztworze stabilizowanym.
6. Aktywator Red Part A (5,5 ml) zawierający 0,5% ProClin™ 950.
7. Substrat Red Part B (1,0 ml).
8. Substrat Red Part C (1,0 ml).
9. Roztwór buforowy Red Part D zawierający (35 ml) 0,5% ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 ml) <0,1% hematoksyliny.
Rozcieńczanie i mieszanie.
ChromoPlex 1 Dual Detection jest zoptymalizowany pod kątem użycia w systemie BOND.
W przypadku tego odczynnika nie jest konieczne dodawanie wody, mieszanie, rozcieńczanie ani miareczkowanie.
Wymagane materiały niedołączone do zestawu
Środek do zamykania preparatów mikroskopowych kompatybilny z ChromoPlex 1 Dual Detection (zob. Środki ostrożności).
W rozdziale „Korzystanie z odczynników BOND" w dokumentacji użytkownika BOND podano pełną listę materiałów wymaganych do
przygotowania próbki i barwienia immunohistochemicznego przy użyciu systemu BOND.
Przechowywanie i trwałość
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie zamrażać. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie umieszczonej na
uchwycie tacki. Niezwłocznie po użyciu ponownie umieścić w temperaturze 2-8 °C.
ProClin™ 950.
DS9477
Page 45