Uso Previsto - Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Catálogo Nº.: DS9477

Uso previsto

Este sistema de detección es para uso diagnóstico in vitro.
ChromoPlex 1 Dual Detection es un sistema sin biotina de anticuerpos conjugados que se fijan a la peroxidasa de rábano picante (HRP)
polimérica y a la fosfatasa alcalina (AP) para la detección de anticuerpos primarios de lgG de conejo y ratón unidos a tejidos. Se utiliza
para la tinción de secciones de tejido incluido en parafina y fijado con formol en el sistema automático BOND (incluye el sistema Leica
BOND-MAX y el sistema Leica BOND-III).
La interpretación clínica de cualquier tinción o de su ausencia deberá complementarse con estudios morfológicos. Se deben realizar
controles adecuados cuyos resultados deberá evaluar un patólogo cualificado en el contexto del historial clínico del paciente y de otras
pruebas diagnósticas.
El ChromoPlex 1 Dual Detection debe utilizarse conforme a unas prácticas de laboratorio adecuadas en relación al uso de controles de
tejidos. Para la verificación, los laboratorios deben teñir cada muestra de paciente junto con los controles positivo y negativo, además
de otros controles de tejidos específicos, según sea necesario.
Resumen y explicación
Las técnicas inmunohistoquímicas pueden utilizarse para detectar la presencia de antígenos en tejidos y células (véase "Uso de
Reactivos BOND" en la documentación del usuario de BOND).
ChromoPlex 1 Dual Detection utiliza una tecnología novedosa de polimerización controlada para preparar anticuerpos conjugados que
se fijan a la AP y HRP polimérica. El sistema de detección evita el uso de estreptavidina y biotina, eliminando de esta forma la tinción no
específica producida por la biotina endógena.
Este es el funcionamiento de ChromoPlex 1 Dual Detection:
• Se incuba la muestra con peróxido de hidrógeno para anular la actividad de la peroxidasa endógena.
• Se aplica un cóctel de anticuerpos primarios específicos de ratón y conejo suministrado por el usuario.
• El reactivo Poli-HRP IgG localiza anticuerpos de ratón.
• El reactivo Poli-AP IgG localiza anticuerpos de conejo.
• Con el primer sustrato cromógeno 3,3'-tetraclorhidrato hidrato de diaminobencidina o (DAB) se visualizan los anticuerpos de ratón a
través de un precipitado marrón.
• Con el segundo sustrato cromógeno (Fast Red), se visualizan los anticuerpos de conejo a través de un precipitado rojo.
• La contratinción con hematoxilina (azul) permite la visualización de los núcleos celulares.
El uso combinado de ChromoPlex 1 Dual Detection con el sistema automático BOND reduce la posibilidad de aparición de errores
humanos y la variabilidad inherente derivada de la dilución del reactivo por separado, el pipeteo manual y la aplicación del reactivo.
Reactivos suministrados
Los reactivos suministrados son suficientes para 25 series de tinción BOND individuales, o un máximo de 100 portaobjetos.
Para conseguir un máximo de 100 portaobjetos a partir de este sistema de detección, estos se deben separar en grupos de 4 como
mínimo, por cada unidad de tinción de portaobjetos.
La separación en grupos inferiores a 4 dará lugar a menos portaobjetos teñidos.
1. Peroxide Block (15 mL) peróxido de hidrógeno al 3-4 %.
2. Polymer mHRP (15 mL) Poly-HRP antirratón que contiene suero animal al 10 % (v/v) en solución salina amortiguada con tris y
ProClin™ 950 al 0,1 %.
3. Polymer rAP (15 mL) Poly-AP anticonejo que contiene suero animal al 10 % (v/v) en solución salina amortiguada con tris y ProClin™
950 al 0,09 %.
4. DAB Part 1 (2 mL) 3,3'-tetraclorhidrato hidrato de diaminobendidina 66 mM en solución estabilizante.
5. DAB Part B (35 mL) peróxido de hidrógeno ≤0,1 % (v/v) en solución estabilizante.
6. Red Part A (5.5 mL) activador con ProClin™ 950 al 0,5 %.
7. Red Part B (1.0 mL) sustrato.
8. Red Part C (1.0 mL) substrato.
9. Red Part D (35 mL) solución amortiguada con ProClin™ 950 al 0,5 %.
10. Hematoxylin DS9477 (15 mL) hematoxilina <0,1 %.
Dilución y mezcla
ChromoPlex 1 Dual Detection está optimizado para su empleo con el sistema BOND.
No es necesaria la reconstitución, mezcla, dilución o titulación de estos reactivos.
Material necesario pero no suministrado
Medios de montaje compatibles con ChromoPlex 1 Dual Detection (véase el apartado "Precauciones").
DS9477
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