Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 19

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Artikelnummer: DS9477
Avsedd användning
Detta detektionssystem är endast avsett för in vitro diagnostiskt bruk.
ChromoPlex 1 Dual Detection är ett biotinfritt antikroppskonjugat med polymera pepparrotsperoxidas-"linker" (HRP) och polymer alkalisk
fosfatas-"linker" (AP) för detektion av vävnadsbundna primära IgG- antikroppar från mus och kanin. Systemet är avsett för infärgning av
områden med formalinfixerad, paraffininbäddad vävnad på det automatiserade systemet BOND (som innefattar systemen Leica BOND-
MAX och Leica BOND-III).
Klinisk tolkning av infärgning eller avsaknad av infärgning ska kompletteras med morfologiska studier. Lämpliga kontroller ska bedömas
mot bakgrund av patientens anamnes och andra diagnostiska tester av en kvalificerad patolog.
ChromoPlex 1 Dual Detection måste användas med god laboratoriesed vid utförande av vävnadskontroller. För kontroll ska labbet utföra
infärgning av alla patientprover tillsammans med positiva, negativa och andra vävnadsspecifika kontroller enligt behov.
Sammanfattning och förklaring
Immunohistokemiska tekniker kan användas för att påvisa förekomst av antigener i vävnad och celler.
Vävnad och celler (se "Använda BOND reagenser" i BOND användarhandbok).
ChromoPlex 1 Dual Detection använder sig av en ny kontrollerad polymeriseringsteknik för beredning av antikroppskonjugat med
polymera HRP-linker och AP-linker. Detektionssystemet använder inte streptavidin eller biotin och undviker därmed icke-specifik
infärgning av endogent biotin.
ChromoPlex 1 Dual Detection fungerar enligt följande:
• Provet inkuberas med väteperoxid för att kväva endogen peroxidasaktivitet.
• En cocktail med specifika primära mus- och kaninantikroppar tillsätts. Dessa antikroppar tillhandahålls av användaren.
• Poly-HRP-IgG-reagenset binder till musantikroppar.
• Poly-AP-IgG-reagenset binder till kaninantikroppar.
• Det första substratkromogenet, 3,3'-Diaminobenizidin tetrahydroklorid hydrat (DAB) gör musantikropparna synliga genom ett brunt
precipitat.
• Det andra substratkromogenet (Fast Red), gör kaninantikropparna synliga genom ett rött precipitat.
• Genom motfärgning med hematoxylin (blå) kan cellkärnan synliggöras.
Användning av ChromoPlex 1 Dual Detection tillsammans med det automatiserade systemet BOND minskar risken för mänskliga fel och
ingående variation på grund av individuell reagensspädning och manuell pipettering och tillsats av reagenser.
Reagenser förutsatt
De medföljande reagenserna räcker till 25 separata BOND-infärgningar eller upp till 100 objektglas.
För att uppnå infärgning av det maximala antalet objektglas (100 st) i detta detektionssystem, ska glasen köras i satser på 4 eller fler per
infärgningsenhet. Körningar med satser med färre än 4 objektglas i en sats kommer att ge färre infärgade objektglas.
1. Peroxide Block (15 mL) 3-4% väteperoxid.
2. Polymer mHRP (15 mL) poly-HRP anti-mus med 10 % viktprocent animaliskt serum i Tris-buffrad saltlösning och 0,1 %
950.
3. Polymer rAP (15 mL) poly-AP anti-kanin med 10 % viktprocent animaliskt serum i Tris-buffrad saltlösning och 0,09 % ProClin™ 950.
4. DAB Part 1 (2 mL) 66 mM 3,3'-Diaminobenzidin tetrahydroklorid hydrat i en stabiliserande lösning.
5. DAB Part B (35 mL) ≤ 0,1 % viktprocent väteperoxid i en stabiliserande lösning.
6. Red Part A (5.5 mL) aktivator med 0,5 % ProClin™ 950.
7. Red Part B (1.0 mL) substrat.
8. Red Part C (1.0 mL) substrat.
9. Red Part D (35 mL) buffertlösning med 0,5 % ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 mL) < 0,1 % Hematoxylin.
Spädning och blandning
ChromoPlex 1 Dual Detection är optimerat för att användas med BOND-systemet.
Reagenserna behöver inte rekonstitueras, blandas, spädas eller titreras.
Nödvändiga material som inte medföljer
Monteringsmedium som är kompatibelt med ChromoPlex 1 Dual Detection (se Säkerhetsföreskrifter).
Se "Använda BOND reagenser" i BOND användarhandbok för en fullständig lista över material som behövs för behandling av prover och
immunohistokemisk infärgning med BOND-systemet.
Förvaring och stabilitet
Lagras vid 2–8 °C. Får ej frysas. Använd ej efter utgångsdatum som finns angivet på brickans handtag. Sätt tillbaka i 2–8 °C direkt efter
användning.
Det finns inga tydliga tecken som påvisar instabilitet hos denna produkt. Därför ska positiva och negativa kontroller köras tillsammans
med okända prover (se "Kvalitetskontroll" i "Använda BOND reagenser" i BOND användarhandbok).
Om oväntad infärgning inträffar som inte kan förklaras av variationer i laboratorierutiner och du misstänker att det är fel på
detektionssystemet ska du kontakta din lokala återförsäljare eller Leica Biosystems-representant så snart som möjligt.
Lagringsförhållanden utöver de som anges ovan ska verifieras av användaren .
1
ProClin™
DS9477
Page 19