Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 48

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Kataloška št.: DS9477
Predvidena uporaba
Ta sistem za zaznavanje je namenjen diagnostični uporabi in vitro.
ChromoPlex 1 Dual Detection je sistem konjugata protitelesa ter polimerne hrenove peroksidaze (HRP) in povezovalnika ter polimerne
alkalne fosfataze (AP) in povezovalnika brez biotina za zaznavanje mišjih in kunčjih primarnih protiteles IgG, vezanih na tkivo. Namenjen
je za barvanje rezin, fiksiranih s formalinom in vstavljenih v parafin, na avtomatiziranem sistemu BOND (vključuje sistem Leica BOND-
MAX in sistem Leica BOND-III).
Klinično tolmačenje kakršnega koli obarvanja ali njegove odsotnosti morajo dopolnjevati morfološke študije. Ustrezne kontrole mora v
okvirju klinične anamneze bolnika in drugih diagnostičnih testov oceniti usposobljen patolog.
Izdelek ChromoPlex 1 Dual Detection je treba uporabljati skladno z dobro laboratorijsko prakso za uporabo tkivnih kontrol. Za
zagotovitev zanesljivosti morajo laboratoriji obarvati vzorec vsakega bolnika skupaj s pozitivno in negativno kontrolo ter po potrebi vsemi
drugimi kontrolami, specifičnimi za tkivo.
Povzetek in razlaga
Imunohistokemijske tehnike se lahko uporabijo za prikaz prisotnosti antigenov v tkivih in celicah (glejte »Uporaba reagentov BOND« v
priloženi dokumentaciji za uporabnike sistema BOND).
Izdelek ChromoPlex 1 Dual Detection uporablja novo tehnologijo nadzorovane polimerizacije za pripravo konjugatov protiteles s HRP
in povezovalnikom oz. AP in povezovalnikom. Pri sistemu za zaznavanje se ne uporabljata streptavidin in biotin, zato se izognemo
nespecifičnem barvanju, ki je posledica endogenega biotina.
ChromoPlex 1 Dual Detection deluje na naslednji način:
• Vzorec se inkubira v vodikovem peroksidu, da se zaustavi delovanje endogene peroksidaze.
• Doda se mešanica specifičnih primarnih mišjih in kunčjih protiteles.
• Reagent Poly-HRP IgG lokalizira mišja protitelesa.
• Reagent Poly-AP IgG lokalizira kunčja protitelesa.
• Kromogen za prvi substrat, 3,3'-diaminobenizidin tetrahidroklorid hidrat (DAB), prikaže mišja protitelesa v rjavi oborini.
• Kromogen za drugi substrat (Fast Red) prikaže kunčja protitelesa v rdeči oborini.
• Nasprotno barvanje s Hematoxylinom (modro) omogoča vizualizacijo celičnih jeder.
Uporaba izdelka ChromoPlex 1 Dual Detection skupaj z avtomatiziranim sistemom BOND zmanjša možnost človeške napake in
variabilnosti, ki sama po sebi izhaja iz redčenja posameznega reagenta, ročnega pipetiranja in nanosa reagenta.
Priloženi reagenti
Priloženi reagenti zadostujejo za 25 posameznih barvanj s sistemom BOND oziroma največ 100 preparatov.
Če želite pri sistemu za zaznavanje doseči barvanje 100 preparatov, morate preparate združiti po 4 ali več na sklop za barvanje
preparatov. Pri obdelavi več kot 4 vzorcev skupaj bo obarvanih manj preparatov.
1. Peroxide Block (15 ml) 3–4-% vodikov peroksid.
2. Polymer mHRP (15 ml) Poli-HRP proti mišjim protitelesom, ki vsebuje 10-% (v/v) živalski serum v fiziološki raztopini s pufrom tris in
0,1 % konzervansa ProClin™
3. Polymer rAP (15 ml) Poli-AP proti kunčjim protitelesom, ki vsebuje 10-% (v/v) živalski serum v fiziološki raztopini s pufrom tris in
0,09 % konzervansa ProClin™ 950.
4. DAB Part 1 (2 ml) 66 mM 3,3'-diaminobenzidin tetrahidroklorid hidrat v raztopini stabilizatorja.
5. DAB Part B (35 ml) ≤ 0,1-% (v/v) vodikov peroksid v raztopini stabilizatorja.
6. Red Part A (5,5 ml) aktivator, ki vsebuje 0,5 % konzervansa ProClin™ 950.
7. Substrat Red Part B (1,0 ml).
8. Substrat Red Part C (1,0 ml).
9. Red Part D (35 ml) puferska raztopina, ki vsebuje 0,5 % konzervansa ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 ml) < 0,1-% hematoksilin.
Redčenje in mešanje
Izdelek ChromoPlex 1 Dual Detection je optimiziran za uporabo na sistemu BOND.
Rekonstitucija, mešanje, redčenje ali titracija teh reagentov niso potrebni.
Potrebni materiali, ki niso priloženi
Pritrjevalni medij, združljiv z izdelkom ChromoPlex 1 Dual Detection (glejte poglavje Previdnostni ukrepi).
Za celoten seznam materialov, potrebnih za obdelavo vzorcev in imunohistokemijsko barvanje pri uporabi sistema BOND, glejte poglavje
»Uporaba reagentov BOND« v priloženi dokumentaciji za uporabnike sistema BOND.
Shranjevanje in stabilnost
Hraniti pri temperaturi 2–8 °C. Ne zamrzujte. Ne uporabljajte po datumu izteka roka uporabnosti, navedenem na oznaki na ročaju
pladnja. Takoj po uporabi ohladite na temperaturo 2–8 °C.
Ni očitnih znakov, ki bi nakazovali nestabilnost tega izdelka, zato morate hkrati z neznanimi vzorci testirati tudi pozitivne in negativne
kontrole (glejte »Kontrola kakovosti« v poglavju »Uporaba reagentov BOND« v uporabniški dokumentaciji za sistem BOND).
Če opazite nepričakovano barvanje, ki ga ni mogoče pojasniti z razlikami pri laboratorijskih postopkih, in če sumite na težavo s sistemom
za zaznavanje, se takoj obrnite na lokalnega distributerja ali regionalno pisarno družbe Leica Biosystems.
Uporabnik mora potrditi ustreznost pogojev shranjevanja, če se ti razlikujejo od zgoraj navedenih
DS9477
Page 48
950.
.
1