Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 16

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Nº de catálogo: DS9477
Utilização Prevista
Este sistema de detecção destina-se a utilização diagnóstica in vitro.
ChromoPlex 1 Dual Detection é um sistema conjugado de anticorpos ligante sem biotina, de peroxidase polimérica de rábano (HRP) e
de anticorpos ligantes de fosfatase alcalina polimérica (AP) para a detecção de anticorpos primários lgG de ratinho e coelho ligados a
tecidos. Destina-se à coloração de secções de tecido fixado com formalina, embebido em parafina no sistema automático BOND (inclui
o sistema Leica BOND-MAX e o sistema Leica BOND-III).
A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deverá ser complementada por estudos morfológicos. Devem ser
avaliados os controlos adequados no contexto do histórico clínico do paciente e outros testes de diagnóstico por um patologista
qualificado.
O ChromoPlex 1 Dual Detection deve ser utilizado no âmbito das melhores práticas laboratoriais de utilização de controlos de tecido.
Por segurança, os laboratórios deverão colorir cada amostra de paciente em conjunto com controlos positivos, negativos e outros
específicos do tecido, conforme necessário.
Resumo e Explicação
Podem ser utilizadas técnicas imunohistoquímicas para demonstrar a presença de antigénios em tecidos e células (consulte "Utilização
de reagentes BOND", na sua documentação de utilizador BOND).
O ChromoPlex 1 Dual Detection utiliza uma nova tecnologia de polimerização controlada para preparar o conjugado ligante HRP
polimérico e ligante de anticorpo AP. O sistema de detecção evita a utilização de estreptavidina e biotina e elimina assim a coloração
não específica resultante de biotina endógena.
O ChromoPlex 1 Dual Detection funciona da seguinte forma:
• A amostra é incubada com peróxido de hidrogénio para eliminar a actividade das peroxidases endógenas.
• É aplicado um cocktail de anticorpos primários específicos de ratinho e coelho.
• O reagente Poli-HRP IgG localiza os anticorpos de ratinho.
• O reagente Poli-AP IgG localiza os anticorpos de coelho.
• O primeiro substrato cromogénico, tetrahidrocloreto hidrato de 3,3' diaminobenizidina (DAB) visualiza os anticorpos de ratinho
através da formação de um precipitado castanho.
• O segundo substrato cromogénico (Fast Red), visualiza os anticorpos de coelho através da formação de um precipitado vermelho.
• A contracoloração com hematoxilina (azul) permite a visualização dos núcleos celulares.
Utilizando o ChromoPlex 1 Dual Detection em combinação com o sistema automático BOND, reduz-se a possibilidade de erro humano
e a inerente variabilidade resultante da diluição de reagentes individuais, pipetagem manual e aplicação de reagentes.
Reagentes Fornecidos
Os reagentes fornecidos são suficientes para 25 testes de coloração individual BOND ou para um máximo de 100 lâminas.
Para conseguir um máximo de 100 lâminas neste sistema de detecção, as lâminas devem ser agrupadas em quantidades de 4 ou mais,
por Conjuntos de Coloração de Lâminas. O agrupamento em quantidades inferiores a 4 resultará em menos lâminas coloridas.
1. Peroxide Block (15 mL) 3-4% Peróxido de hidrogénio.
2. Polymer mHRP (15 mL) Poly-HRP anti-ratinho contendo 10% (v/v) de soro animal em solução Tris-salina tamponada e 0,1%
ProClin™ 950.
3. Polymer rAP (15 mL) Poly-AP anti-coelho contendo 10% (v/v) soro animal em solução Tris-salina tamponada e 0,09% ProClin™ 950.
4. DAB Part 1 (2 mL) 66 mM Tetrahidrocloreto hidrato de 3,3'-diaminobenzidina em solução estabilizante.
5. DAB Part B (35 mL) ≤0,1% (v/v) Peróxido de hidrogénio em solução estabilizante.
6. Red Part A (5.5 mL) Activador contendo 0,5% ProClin™ 950.
7. Red Part B (1.0 mL) Substrato.
8. Red Part C (1.0 mL) Substrato.
9. Red Part D (35 mL) Solução tamponada contendo 0,5% ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 mL) <0,1% Hematoxilina.
Diluição e Mistura
O ChromoPlex 1 Dual Detection está optimizado para utilização no sistema BOND.
A reconstituição, mistura, diluição ou titulação destes reagentes não é necessária.
Materiais Necessários Mas Não Fornecidos
Meios de montagem compatíveis com o ChromoPlex 1 Dual Detection (consultar as Precauções).
Consulte a secção "Utilização de reagentes BOND" na sua documentação de utilizador BOND para uma lista completa dos materiais
necessários para tratamento de amostras e coloração imunohistoquímica, utilizando o sistema BOND.
DS9477
Page 16