Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 7

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
N. catalogo: DS9477
Uso previsto
Questo sistema di rilevazione è inteso per un uso diagnostico in vitro.
ChromoPlex 1 Dual Detection è un sistema di anticorpi coniugati alla perossidasi di rafano polimerica (HRP)-linker ed alla fosfatasi
lcalina polimerica (AP)-linker, senza biotina, per la rilevazione di anticorpi primari IgG di topo e di coniglio legati a tessuto. È previsto per
la colorazione di sezioni fissate in formalina, o di tessuto incluso in paraffina con il sistema automatizzato BOND (include il sistema Leica
BOND-MAX e il sistema Leica BOND-III).
L'interpretazione clinica di qualsiasi colorazione o della sua assenza devono essere integrate da studi morfologici. Controlli appropriati
devono essere valutati da un patologo qualificato nel contesto della storia clinica del paziente e di altri test diagnostici.
Il sistema ChromoPlex 1 Dual Detection deve essere usato con le metodiche della buona pratica di laboratorio relative all'uso di controlli
di tessuto. Per sicurezza, i laboratori devono colorare i campioni di ciascun paziente insieme a controlli positivi e negativi ed altri controlli
specifici del tessuto, come ritenuto necessario.
Sommario e spiegazione
Le tecniche immunoistochimiche possono essere usate per dimostrare la presenza di antigeni in tessuti e cellule (vedere "Utilizzo dei
reagenti BOND" nella documentazione di BOND per l'utilizzatore).
ChromoPlex 1 Dual Detection utilizza una nuova tecnologia di polimerizzazione controllata per preparare gli anticorpi coniugati polimerici
HRP-linker e AP-linker. Il sistema di rilevazione evita l'uso di streptavidina e biotina, eliminando quindi colorazioni non specifiche che
risultano dalla biotina endogena.
ChromoPlex 1 Dual Detection funziona nel modo seguente:
• Il campione viene incubato con perossido di idrogeno per attenuare l'attività della perossidasi endogena.
• Viene applicato un cocktail di anticorpi primari anti-topo e anti-coniglio fornito dall'utilizzatore.
• Il reagente Poly-HRP IgG localizza gli anticorpi anti-topo.
• Il reagente Poly-AP IgG localizza gli anticorpi anti-coniglio.
• Il primo substrato cromogeno, il 3,3'-Diaminobenzidina tetraidrocloruro idrato (DAB), visualizza gli anticorpi anti-topo per mezzo di un
precipitato marrone.
• Il secondo substrato cromogeno (Fast Red), visualizza gli anticorpi anti-coniglio mediante un precipitato rosso.
• La colorazione di contrasto con ematossilina (blu) permette di visualizzare il nucleo delle cellule.
L'utilizzo di ChromoPlex 1 Dual Detection in combinazione con il sistema automatizzato BOND riduce la possibilità di errore umano e la
variabilità intrinseca risultante dalla diluizione individuale del reagente, dalla pipettatura manuale e dall'applicazione del reagente.
Reagenti forniti
I reagenti forniti sono sufficienti per 25 corse individuali di colorazione con BOND o per un massimo di 100 vetrini.
Per ottenere un massimo di 100 vetrini da questo sistema di rilevazione, i vetrini devono essere raggruppati in gruppi di 4 o superiori,
nell'assemblaggio di colorazione dei vetrini. Il raggruppamento in quantità inferiori a 4 porterà alla colorazione di un numero inferiore di
vetrini.
1. Peroxide Block (15 mL) 3-4% perossido di idrogeno.
2. Polymer mHRP (15 mL) anti-topo Poly-HRP contenente il 10% (v/v) di siero animale in soluzione salina tamponata con Tris e 0,1%
ProClin™ 950.
3. Polymer rAP (15 mL) anti-coniglio Poly-AP contenente il 10% (v/v) di siero animale in soluzione salina tamponata con Tris e 0,09%
ProClin™ 950.
4. DAB Part 1 (2 mL) 66 mM 3,3'-Diaminobenzidina tetraidrocloruro idrato in una soluzione stabilizzante.
5. DAB Part B (35 mL) ≤0,1% (v/v) perossido di idrogeno in una soluzione stabilizzante.
6. Red Part A (5,5 mL) Catalizzatore contenente 0,5% ProClin™ 950.
7. Red Part B (1,0 mL) Substrato.
8. Red Part C (1,0 mL) Substrato.
9. Red Part D (35 mL) Soluzione tampone contenente 0,5% ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 mL) <0,1% Ematossilina.
Diluizione e miscelazione
ChromoPlex 1 Dual Detection è ottimizzato per l'utilizzo con il sistema BOND.
La ricostituzione, la miscelazione, la diluizione o la titolazione di questi reagenti non è richiesta.
Materiali richiesti ma non forniti
Mezzi di supporto compatibili con il ChromoPlex 1 Dual Detection (vedere Precauzioni).
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