Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 42

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Номер по каталогу: DS9477
Назначение
Данная система обнаружения предназначена для диагностики in vitro.
Система двойного обнаружения ChromoPlex 1 Dual Detection представляет собой не содержащую биотина систему для
формирования конъюгатов антител, в состав которой входят подвергшиеся полимеризации пероксидаза хрена (HRP)
и щелочная фосфатаза (AP). Система предназначена для обнаружения первичных антител IgG мыши и кролика, образующих
связи с различными тканями / клетками. Этот реактив предназначен для окрашивания срезов фиксированных формалином
и залитых в парафин тканей, которое проводится с использованием автоматизированной системы BOND (включающей системы
BOND-MAX и BOND-III компании Leica).
Клиническая интерпретация любого окрашивания или его отсутствия должна дополняться данными морфологических
исследований. Надлежащие контроли должны оцениваться квалифицированным патогистологом с учетом анамнеза пациента
и результатов других диагностических исследований.
Система двойного обнаружения ChromoPlex 1 Dual Detection должна использоваться в сочетании с передовыми методами
работы лабораторий в отношении применения тканей в качестве контроля. В целях гарантии лаборатории должны окрашивать
каждый образец, взятый у пациента, в сочетании с положительными и отрицательными контролями, а также тканями,
использующимися в качестве специфического контроля, насколько это необходимо.
Краткое изложение и пояснение
Иммуногистохимические методы могут использоваться для выявления антигенов в тканях и клетках (смотрите монографию
«Применение реактивов BOND» в документации пользователя BOND).
В системе двойного обнаружения ChromoPlex 1 Dual Detection используется новая технология контролируемой полимеризации,
что позволило подготовить сшивающие белки HRP-линкер и AP-линкер для сшивания полимеров, чтобы обеспечить
формирование конъюгата антител с другими соединениями. Система обнаружения позволяет избежать использования
стрептавидина и биотина, следовательно, устраняет неспецифическое окрашивание, обусловленное эндогенным биотином.
Система двойного обнаружения ChromoPlex 1 Dual Detection работает следующим образом:
• Образец инкубируется в присутствии пероксида водорода для того, чтобы подавить активность эндогенной пероксидазы.
• Используйте смесь специфических первичных антител мыши и кролика, которые предоставляются пользователем.
• Реактив Poly-HPR IgG локализует антитела мыши.
• Реактив Poly-AP IgG reagent локализует антитела кролика.
• Первый субстрат хромогена, 3,3-диаминобензидина тетрахлорид гидрат (DAB), позволяет визуализировать антитела мыши
за счет образования коричневого осадка.
• Второй субстрат хромогена (Fast Red) делает видимыми антитела кролика за счет образования преципитата красного цвета.
• Гематоксилин Hematoxylin (синий), контрастирующий краситель, дает возможность визуализировать ядра клеток.
Применение системы двойного обнаружения ChromoPlex 1 Dual Detection в сочетании с автоматизированной системой BOND
снижает вероятность человеческой ошибки и вариабельность, присущую процессам разведения отдельных реактивов, ручного
пипетирования и нанесения реактивов.
Реактивы, входящие в комплект поставки
Реактивы поставляются в количестве, достаточном для выполнения 25 отдельных процессов окрашивания с использованием
BOND или получения максимум 100 препаратов.
Чтобы получить максимальное (100) число препаратов с использованием этой системы обнаружения, препараты следует
объединить в серию по 4 или более в расчете на установку, использующуюся для окрашивания препаратов Slide Staining
Assembly. Формирование серий в количествах менее 4 приведет к получению меньшего числа окрашенных препаратов.
1. Блок пероксида Peroxide Block (15 мл): 3-4 % пероксид водорода.
2. Polymer mHRP (15 млб): полимер Poly-HRP для связывания антител мыши, содержащий 10 % (объем/объем) сыворотку
животных в трис-солевом буферном растворе и 0,1 %
3. Polymer rAP (15 млб): полимер Poly-AP для связывания антител кролика, содержащий 10 % (объем/объем) сыворотку
животных в трис-солевом буферном растворе и 0,09 % ProClin™ 950.
4. Реактив DAB Part 1 (2 млб): 66 мМ 3,3'-Диаминобензидина тетрагидрохлорида гидрат в стабилизирующем растворе.
5. Реактив DAB Part B (35 млб): ≤0,1 % (объем/объем) пероксид водорода в стабилизирующем растворе.
6. Реагент Red Part A (5,5 млб) Activator - Активатор, содержащий 0,5 % ProClin™ 950.
7. Субстрат Red Part B (1,0 млб)
8. Субстрат Red Part C (1,0 млб)
9. Реагент Red Part D (35 млб) - буферный раствор, содержащий 0,5 % ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 млб): <0,1 % гематоксилин.
Разведение и смешивание
Система двойного обнаружения ChromoPlex 1 Dual Detection оптимизирована для использования на системе BOND.
Этот реактив не требует восстановления, смешивания, разведения или титрования.
DS9477
Page 42
ProClin™ 950.