Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 39

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Nr. catalog: DS9477
Utilizare prevăzută
Acest sistem de detecție este destinat utilizării pentru diagnosticare in vitro.
ChromoPlex1 Dual Detection este un sistem conjugat de anticorpi fără biotină cu legătură de peroxidază din hrean (HRP) polimerică și
legătură de fosfatază alcalină polimerică
(AP) pentru detectarea anticorpilor primari IgG de șoarece și iepure legați la țesuturi. Este prevăzut pentru colorația de secțiuni de
țesut fixat cu formalină, încorporat în parafină în sistemul automatizat BOND (care include sistemul Leica BOND-MAX și sistemul Leica
BOND-III).
Interpretarea clinică a oricărei colorații sau a absenței acesteia trebuie completată cu studii morfologice. Controalele adecvate trebuie
evaluate în contextul istoricului clinic al pacientului și al altor teste de diagnosticare de către un patolog calificat.
ChromoPlex 1 Dual Detection trebuie utilizat cu bune practici de laborator în utilizarea de țesuturi de control. Pentru asigurare,
laboratoarele trebuie să coloreze fiecare eșantion de la pacient în conjuncție cu țesuturi de control pozitive, negative sau alte controale
specifice, după cum este necesar.
Rezumat și explicație
Pot fi utilizate tehnici imunohistochimice pentru a demonstra prezența antigenilor în țesut și celule (a se vedea „Utilizarea reactivilor
BOND" din documentația de utilizare BOND).
ChromoPlex 1 Dual Detection o tehnologie nouă de polimerizare controlată pentru prepararea conjugatelor de anticorp de legătură HRP
și de legătură AP. Sistemul de detecție evită utilizarea streptavidinei și biotinei, eliminând astfel colorația nespecifică din cauza biotinei
endogene.
ChromoPlex 1 Dual Detection funcționează după cum urmează:
• Specimenul este incubat cu apă oxigenată pentru a stinge activitatea peroxidazei endogene.
• Se aplică un cocktail de anticorpi primari de șoarece și iepure furnizat de utilizator.
• Reactivul IgG Poly-HRP localizează anticorpii de șoarece.
• Reactivul Poly-AP IgG localizează anticorpii de iepure.
• Primul substrat cromogen, tetraclorură hidrată de 3,3'-diaminobenizidină (DAB), vizualizează anticorpii de șoarece printr-un precipitat
cafeniu.
• Al doilea substrat cromogen (Fast Red) vizualizează anticorpii de iepure printr-un precipitat roșu.
• Contracolorația cu Hematoxylin (albastru) permite vizualizarea nucleelor celulelor.
Utilizarea ChromoPlex 1 Dual Detection, în combinație cu sistemul automat BOND, reduce posibilitatea producerii de erori umane și
variabilitatea inerentă care rezultă din diluția individuală a reactivului, pipetarea manuală și aplicarea reactivului.
Reactivi furnizați
Reactivii furnizați sunt suficienți pentru 25 de colorări BOND individuale sau maxim 100 de lamele.
Pentru a realiza un maxim de 100 de lamele de la acest sistem de detecție, lamelele trebuie grupate în loturi cu cantități de 4 sau mai
mari, conform Ansamblului de colorație de Lamele. Loturile cu cantități mai mici de 4 vor produce mai puține lamele colorate.
1. Peroxide Block (15 ml) 3-4% apă oxigenată.
2. Polymer mHRP (15 ml) Poly-HRP anti-șoarece conținând 10% (v/v) ser animal în soluție salină tamponată cu trometamină și
0,1% ProClin™ 950.
3. Polymer rAP (15 ml) Poly-AP anti-iepure conținând 10% (v/v) ser animal în soluție salină tamponată cu trometamină și 0,09% ProClin™
950.
4. DAB Part 1 (2 ml) 66 mM hidrat de tetraclorură de 3,3'-diaminobenzidină în soluție stabilizatoare.
5. DAB Part B (35 ml) ≤0,1% (v/v) Apă oxigenată în soluție stabilizatoare.
6. Red Part A (5,5 ml) Activator conținând 0,5% ProClin™ 950.
7. Substrat Red Part B (1,0 ml).
8. Substrat Red Part C (1,0 ml).
9. Red Part D (35 ml) Soluție tampon conținând 0,5% ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 ml) <0,1% Hematoxylin.
Diluare și amestecare
ChromoPlex 1 Dual Detection este optimizată pentru utilizare cu sistemul BOND.
Reconstituirea, amestecarea, diluarea sau titrarea acestor reactivi nu sunt necesare.
Materiale necesare, dar care nu sunt furnizate
Mediu de montare compatibil cu ChromoPlex 1 Dual Detection (a se vedea Măsuri de precauție).
Consultați „Utilizarea reactivilor BOND" din documentația dumneavoastră de utilizare a sistemului BOND pentru o listă completă
a materialelor necesare pentru tratarea specimenelor și colorația imunohistochimică utilizând sistemul BOND.
Depozitare și stabilitate
A se depozita la 2–8 °C. A nu se congela. A nu se utiliza după data expirării indicată pe eticheta de pe mânerul tăvii. A se returna la
2–8 °C imediat după utilizare.
DS9477
Page 39