Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 53

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Katalógové č.: DS9477
Zamýšľané použitie
Tento detekčný systém je určený na diagnostické použitie in vitro.
ChromoPlex 1 Dual Detection je systém konjugátu protilátky s mostíkom polymérovej chrenovej peroxidázy (HRP) a polymérovej
alkalickej fosfatázy bez biotínu na detekciu primárnych myších a králičích IgG protilátok viazaných na tkanivo. Tento systém je určený na
farbenie rezov tkaniva zaliatych do parafínu fixovaných formalínom v automatizovanom systéme BOND (vrátane systémov Leica BOND-
MAX a Leica BOND-III).
Klinická interpretácia akéhokoľvek zafarbenia alebo jeho neprítomnosti musí byt doplnená morfologickým preskúmaním. Príslušné
kontroly sa musia vyhodnotiť v kontexte klinickej anamnézy pacienta a iných diagnostických testov vykonávaných kvalifikovaným
patológom.
Systém ChromoPlex 1 Dual Detection sa musí pri kontrolách tkanivom používať v rámci osvedčených laboratórnych postupov. V záujme
istoty majú laboratória farbiť každú pacientsku vzorku spolu s pozitívnou, negatívnou a inou kontrolou špecifickým tkanivom podľa
potreby.
Zhrnutie a vysvetlenie
Imunohistochemické techniky možno použiť na preukázanie prítomnosti antigénov v tkanivách a bunkách (pozrite si časť „Používanie
činidiel BOND" v používateľskej dokumentácii k systému BOND).
V systéme ChromoPlex 1 Dual Detection sa využíva nová technológia riadenej polymerizácie na prípravu konjugátov protilátky s
mostíkom polymérovej HRP a mostíkom polymérovej AP. V detekčnom systéme sa zamedzuje použitiu streptavidínu a biotínu, čím sa
eliminuje nešpecifické zafarbenie v dôsledku endogénneho biotínu.
ChromoPlex 1 Dual Detection funguje takto:
• Vzorka sa inkubuje s peroxidom vodíka, aby sa oslabila aktivita endogénnej peroxidázy.
• Aplikuje sa kokteil špecifických primárnych myšacích a králičích protilátok dodaných používateľom.
• Činidlo Poly-HRP IgG lokalizuje myšie protilátky.
• Činidlo Poly-AP IgG lokalizuje králičie protilátky.
• Prvý substrát/chromogén, 3,3'-diaminobenizidín tetrahydrochlorid hydrát (DAB), vizualizuje myšie protilátky prostredníctvom hnedej
zrazeniny.
• Druhý substrát/chromogén (Fast Red) vizualizuje králičie protilátky prostredníctvom červenej zrazeniny.
• Kontrastné farbenie prípravkom Hematoxylin (modré) umožňuje vizualizáciu bunkových jadier.
Použitie systému ChromoPlex 1 Dual Detection v kombinácii s automatizovaným systémom BOND znižuje možnosť ľudskej chyby a
inherentnej variability vyplývajúcej z individuálneho riedenia činidiel, manuálneho pipetovania a aplikácie činidiel.
Dodané činidlá
Dodané činidlá postačujú na 25 individuálnych cyklov farbenia BOND, resp. maximálne na 100 sklíčok.
Ak chcete v tomto detekčnom systéme dosiahnuť maximum 100 sklíčok, sklíčka sa musia spracovávať dávkovo v počte 4 alebo viac v
súlade so Zostavou farbenia sklíčok. Výsledkom dávkového spracovania počtu menšieho ako 4 bude menší počet zafarbených sklíčok.
1. Peroxide Block (15 ml) 3 – 4 % peroxid vodíka.
2. Polymer mHRP (15 ml) myšacia protilátka Poly-HRP obsahujúca 10 % (v/v) živočíšneho séra v tris-pufrovanom fyziologickom roztoku
a 0,1 % prípravku ProClin™
3. Polymer rAP (15 ml) králičia protilátka Poly-AP obsahujúca 10 % (v/v) živočíšneho séra v tris-pufrovanom fyziologickom roztoku a
0,09 % prípravku ProClin™
4. DAB Part 1 (2 ml) 66 mM 3,3'-diaminobenzidín tetrahydrochlorid hydrátu v roztoku stabilizátora.
5. DAB Part B (35 ml) ≤0,1 % (v/v) peroxidu vodíka v roztoku stabilizátora.
6. Red Part A (5,5´ ml) aktivátor obsahujúci 0,5 % prípravku ProClin™ 950.
7. Substrát Red Part B (1,0 ml).
8. Substrát Red Part C (1,0 ml).
9. Red Part D (35´ ml) pufor obsahujúci 0,5 % prípravku ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 mL) <0,1 % hematoxylínu.
Riedenie a miešanie
Systém ChromoPlex 1 Dual Detection je optimalizovaný na používanie v systéme BOND.
Rekonštitúcia, miešanie, riedenie ani titrácia týchto činidiel nie sú potrebné.
Požadovaný nedodaný materiál
Upevňovacie médiá kompatibilné so systémom ChromoPlex 1 Dual Detection (pozri časť Bezpečnostné opatrenia).
Úplný zoznam materiálov potrebných na prípravu vzorky a imunohistochemické zafarbenie pomocou systému BOND si pozrite v časti
„Používanie činidiel BOND" v používateľskej dokumentácii k systému BOND.
Uskladnenie a stabilita
Skladujte pri teplote 2 – 8 °C. Nezmrazujte. Nepoužívajte po uplynutí dátumu exspirácie uvedeného na štítku rukoväti tácky. Okamžite
po použití vráťte do teploty 2 – 8 °C.
950.
950.
DS9477
Page 53