Leica BIOSYSTEMS DS9477 Mode D'emploi page 50

ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND
Kat. č.: DS9477
Zamýšlené použití
Tento detekční systém je určen k diagnostickému použití in vitro.
ChromoPlex 1 Dual Detection představuje linker polymerické křenové peroxidázy (HRP) bez obsahu biotinu a systém konjugátu
protilátek linkeru polymerické alkalické fosfatázy (AP) k detekci myších a králičích IgG primárních protilátek navázaných na tkáň.
Je určen k barvení formalínem fixovaných řezů tkáně zalitých v parafínu v automatickém systému BOND (včetně systému Leica BOND-
MAX system a Leica BOND-III system).
Klinickou interpretaci jakéhokoliv barvení či jeho absence je třeba doplnit morfologickými vyšetřeními. a zhodnotit je musí kvalifikovaný
patolog v kontextu s klinickou anamnézou pacienta a jinými diagnostickými testy.
Systém ChromoPlex 1 Dual Detection musí být používán v rámci správné laboratorní praxe a využívat tkáňové kontroly. Pro zajištění
tohoto předpokladu musí laboratoře podle potřeby barvit každý vzorek pacienta ve spojení s pozitivní, negativní a další tkáňově
specifickou kontrolou.
Souhrn a vysvětlení
Imunohistochemické techniky lze použít k průkazu přítomnosti antigenů ve tkáni a v buňkách (viz „Použití reagencií BOND" v uživatelské
dokumentaci BOND).
Systém ChromoPlex 1 Dual Detection využívá novou technologii kontrolované polymerizace k přípravě polymerického HRP linkeru
a protilátkových konjugátů AP linkeru. Detekční systém nevyužívá streptavidin a biotin a proto eliminuje nespecifické barvení v důsledku
přítomnosti endogenního biotinu.
Systém ChromoPlex 1 Dual Detection funguje následujícím způsobem:
• Vzorek je inkubován v peroxidu vodíku za účelem potlačení endogenní aktivity peroxidázy.
• Používá se koktejl specifické primární myší protilátky a králičí protilátky, které dodává uživatel.
• Reagencie Poly-HRP IgG lokalizuje myší protilátky.
• Reagencie Poly-AP IgG lokalizuje králičí protilátky.
• První chromogenní substrát, 3,3' diaminobenzidin tetrahydrochlorid (DAB), vizualizuje myší protilátky hnědým precipitátem.
• Druhý chromogenní substrát (Fast Red) vizualizuje králičí protilátky červeným precipitátem.
• Kontrastní barvení hematoxylinu (modrého) umožňuje buněčných jader.
Použití ChromoPlex 1 Dual Detection v kombinaci s automatickým systémem BOND snižuje možnost lidské chyby a inherentní variability
v důsledku ředění jednotlivých reagencií, manuálního pipetování a použití reagencií.
Dodávané reagencie
Dodávané reagencie jsou dostačující pro 25 samostatných barvení BOND nebo pro maximálně 100 sklíček.
K dosažení maximálního počtu 100 sklíček u tohoto detekčního systému musí být sklíčka dávkována v množství 4 nebo více, podle
sestavy k barvení sklíček. Dávkování v množství menším než 4 bude mít za následek méně zbarvená sklíčka.
1. Peroxide Block (15 ml) 3–4 % peroxid vodíku.
2. Polymer mHRP (15 ml) anti-myší Poly-HRP obsahující 10 % (obj. %) zvířecí sérum ve fyziologickém roztoku pufrovaném roztokem
tris-pufru a 0,1 % ProClin™
3. Polymer rAP (15 ml) anti-králičí Poly-AP obsahující 10 % (obj. %) zvířecí sérum ve fyziologickém roztoku pufrovaném roztokem
tris-pufru a 0,09 % ProClin™ 950.
4. DAB Part 1 (2 ml) 66 mM 3,3' diaminobenzidin tetrahydrochloridu ve stabilizačním roztoku.
5. DAB Part B (35 ml) ≤ 0,1 % (obj. %) peroxidu vodíku ve stabilizačním roztoku.
6. Red Part A (5,5 ml) aktivátor obsahující 0,5 % ProClin™ 950.
7. Red Part B (1,0 ml) substrát.
8. Red Part C (1,0 ml) substrát.
9. Red Part D (35 ml) roztok pufru obsahující 0,5 % ProClin™ 950.
10. Hematoxylin DS9477 (15 ml) < 0,1 % Hematoxylin.
Ředění a míchání
ChromoPlex 1 Dual Detection je optimalizován k použití v systému BOND.
Rekonstituce, míchání, ředění ani titrace těchto reagencií nejsou nutné.
Potřebný materiál, který není součástí dodávky
Fixační média kompatibilní se systémem ChromoPlex 1 Dual Detection (viz Bezpečnostní pokyny).
Úplný seznam materiálů potřebných ke zpracování vzorku a k barvení místa hybridizace in situ pomocí systému BOND system
(včetně systému Leica BOND-MAX system a Leica BOND-III system) je uveden v bodě „Použití reagencií BOND" v uživatelské
dokumentaci BOND.
Skladování a stabilita
Skladujte při teplotě 2–8 °C. Nezmrazujte. Nepoužívejte po uplynutí data exspirace uvedeného na štítku držadla podnosu. Okamžitě
po použití vraťte do prostředí s teplotou 2–8 °C.
DS9477
Page 50
950.